目的:子宫内膜的增殖和蜕膜化对于建立和维持正常的妊娠至关重要。蜕膜化被一系列源于胚胎和母体的调节器所控制。然而,蜕膜化的潜在分子机制尚不完全明确。本课题组前期基因表达分析和RNA测序结果均显示SLP-2在围植入期子宫内膜存在差异性表达,其在着床点的表达显著高于着床旁。研究表明,癌细胞中过表达SLP-2会调节细胞生长,细胞黏附和肿瘤发展,但是SLP-2在子宫内膜基质细胞的增殖和分化中的功能仍不清楚。所以,我们提出假设:SLP-2参与围植入期子宫内膜功能的演变--基质细胞增殖和蜕膜化。方法:1.动物模型建立及标本收集:购买8周龄昆明小鼠饲养正常妊娠模型:将正常性成熟雌鼠与雄鼠合笼交配,次日见阴栓标记为孕1天(D1)。小鼠正常妊娠1、4、5、6、8天脱颈处死,收集子宫组织。假孕模型:将正常性成熟雌鼠与结扎了输精管的雄鼠合笼交配,次日见阴栓标记为假孕1天(PD1)。小鼠假孕1、4、5、6、8天脱颈处死,收集子宫。人工诱导蜕膜化模型:小鼠假孕4天(PD4)一侧宫角注射玉米油诱导蜕膜化,对照侧宫角不作处理作为对照,假孕8天(PD8)处死,收集子宫组织。2.围着床期小鼠子宫内膜中slp-2基因表达模式1)小鼠眞正常妊娠模型中slp-2基因表达模式:对小鼠正常妊娠D1、D4、D5、D6、D8子宫内膜组织进行荧光定量PCR、免疫印迹法和免疫组织化学检测,观察slp-2在子宫内膜中的表达规律。2)小鼠假孕模型中slp-2基因表达模式:对小鼠假孕模型PD1、PD4、PD5、PD6、PD8子宫内膜组织进行荧光定量PCR、免疫印迹法和免疫组织化学检测,观察slp-2在假孕小鼠子宫内膜中的表达模式。3)小鼠人工诱导蜕膜化模型中slp基因表达检测:荧光定量PCR检测小鼠蜕膜化标志基因dtprp的表达确定人工诱导蜕膜化模型是否建立成功;采用荧光定量PCR、免疫印迹法和免疫组化检测观察slp-2的表达。3.人不同月经周期/蜕膜组织中SLP-2基因的表达:对人子宫内膜增生期、分泌期和蜕膜组织进行荧光定量PCR、免疫印迹法和免疫组织进行检测观察SLP-2的表达。4.原代培养小鼠和人子宫内膜基质细胞:利用小鼠假孕4天(PD4)子宫内膜和人不同月经周期子宫内膜组织分离提取基质细胞进行培养,免疫荧光检测Vimentin和Cytokeratin7进行基质细胞纯度鉴定。5.体外诱导蜕膜化:利用雌、孕激素对原代培养的小鼠和人子宫内膜基质细胞进行诱导蜕膜化,运用荧光定量PCR、免疫印迹法、免疫荧光等方法检测相关蜕膜化因子dtprp、IGFBP1、PRL、Desmin的表达,分析slp-2与蜕膜化的关系。6.转染特异性slp-2 si RNA敲低SLP-2表达,分析SLP-2表达对基质细胞增殖、分化(蜕膜化)的影响。结果:1.slp-2在孕早期小鼠子宫内膜中的表达:免疫组化结果显示slp-2在D1,D4主要表达于腺上皮和腔上皮,在D5着床点(IS)主要表达于子宫内膜初级蜕膜区(PDZ),在D6IS,D8IS slp-2的表达逐渐从初级蜕膜区(PDZ)转向次级蜕膜区(SDZ)。在D5和D6的着床旁(IIS),slp-2的表达模式与D1相似,表达于腔上皮和腺上皮。免疫印迹和RT-q PCR结果显示slp-2在D5IS,D6IS,D8IS表达量上调,分别比其对应的IIS表达高。2.slp-2在假孕小鼠模型中的表达:slp-2在假孕PD1,PD4的表达与D1,D4中相似,均表达于腔上皮和腺上皮。在PD5,PD6,PD8子宫内膜基质细胞中几乎不表达。3.slp-2在诱导蜕膜化小鼠模型中的表达:免疫组化,免疫印迹,RT-q PCR显示,与未诱导一侧子宫相比较,slp-2显著高表达于诱导蜕膜化一侧。4.slp-2在小鼠和人子宫内膜基质细胞体外诱导蜕膜化模型中的表达:RT-q PCR、Western blot结果显示,在加入雌孕激素诱导蜕膜化实验组中小鼠和人的相关蜕膜化因子dtprp,IGFBP1,PRL,Desmin表达升高。Slp-2在实验组的表达较对照组明显升高。5.转染slp-2 si RNA实验:RT-q PCR,Western Blot结果显示,敲低slp-2后,小鼠和人相关蜕膜化标志基因dtprp,IGFBP1,PRL在体外诱导蜕膜化条件下,表达显著低于slp-2未敲低组。6.用EDU细胞增殖检测试剂盒检测细胞增殖情况发现,体外诱导蜕膜化的基础上敲除slp-2实验组细胞增殖能力显著降低。结论:1.slp-2可能是调节正常妊娠蜕膜化过程的一个关键因子。2.slp-2主要通过影响子宫内膜基质细胞增殖和分化能力从而影响蜕膜化。