【摘 要】
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该课题初步建立了大鼠肠黏膜微血管内皮细胞系,这也是国际上首例体外培养成功大鼠肠黏膜微血管内皮细胞;建立了大肠杆菌内毒素与肠毒素致肠黏膜微血管内皮细胞的损伤模型、探
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该课题初步建立了大鼠肠黏膜微血管内皮细胞系,这也是国际上首例体外培养成功大鼠肠黏膜微血管内皮细胞;建立了大肠杆菌内毒素与肠毒素致肠黏膜微血管内皮细胞的损伤模型、探讨了其损伤机制并初步探究了七叶亭对肠黏膜微血管内皮细胞的影响,可为研究防治大肠肝菌病的中药方剂以及成分方剂提供技术基础和理论依据.方法是分离出1日龄SD大鼠空肠部位的肠绒毛单元,用吹打法和酶消化法得到黏膜固有层组织块,采用组织块贴壁法培养出肠黏膜微血管内皮细胞.通过局部消化法和差速黏附法纯化,得到纯度较高的细胞,第八因子相关抗原的免疫荧光检测呈阳性,细胞可传十五代以上,其生物特性相对稳定,初步建立了细胞系,为进一步的试验奠定了基础.用添加不同浓度的LPS和LT的培养液,培养细胞12小时,观察细胞形态学变化,并收集上清液,检测细胞液中NO的浓度,以研究LPS和LT对肠黏膜微血管内皮细胞形态学及分泌NO的影响;用添加一定浓度的LPS(1 μ g/ml)和LT(50 μ g/ml)的培养液培养肠黏膜微血管内皮细胞,在不同的时间内检测细胞上清液中NO和ET浓度,以研究LPS和LT的作用与时间的关系.
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