研究背景手足口病（hand,foot and mouth disease,HFMD）是一种急性且具有高度传染性的病毒性皮疹,通常发生在5岁以下有症状感染的儿童身上。手足口病的临床症状通常很轻微,包括发烧、食欲不振、皮疹和水泡,这些不需要特殊治疗。然而,有一些罕见的神经或心脏并发症,如脑膜炎和急性迟缓性瘫痪,可能是致命的。手足口病通常被认为是一种自限性疾病。然而,在过去的20年里,亚洲和太平洋地区人口的反复爆发已经导致严重的疾病、使人衰弱的并发症甚至死亡。20多种肠道病毒基因型可以引发手足口病,其中主要致病原为人肠道病毒71型（enterovirus 71,EV71）和柯萨奇病毒A16型（coxsackievirus A16,CA16）,两者都归属于A型肠道病毒。而病毒的传统检测方法周期长、步骤繁琐。其中分子生物学检测方法灵敏、快速,但是由于需要专业的操作人员和昂贵的仪器,导致此方法难以在基层检验工作中普及。因此,提出更加快速、简便、精准的手足口病病原的体外检测方法是非常有必要的。适配体的出现为病毒的超灵敏快速检测提供了新的潜在的可行性。研究目的本课题研究目的在于通过磁珠-SELEX技术筛选出针对手足口病中两种主要病原EV71和CA16进行适配体的筛选,进而设计一种成本低、检测快速、组成和操作简单的手足口病病原的超灵敏快速检测方法。研究方法选取EV71和CA16两种病毒作为靶标,运用磁珠-SELEX法进行核酸适配体的筛选,在筛选过程中运用凝胶电泳、q PCR、微量核酸测定等方法监测适体筛选的进程。对富集核酸序列进行单克隆验证后测序,之后进行同源性分析与二级结构分析,运用斑点印记杂交,纳米金比色法、ELISA等表征方式验证适体的结合力与特异性。选取具有高结合力与高特异性的适体进行锁式成环,表征环适体的特异性。最后,建立包含双适体夹心、滚环扩增与纳米金可视化显色的病毒检测方法。研究结果经过12轮的适配体筛选,分别筛选到了6条EV71与3条CA16的候选核酸适配体。通过点杂交筛选到3条EV71核酸适配体和2条CA16核酸适配体。通过ELISA验证适配体的亲和力,测得5条适配体的平衡解离常数（Kd值）分别为9.64±1.25 n M、6.45±0.22 n M、17.53±2.92 n M、21.40±5.27 n M、14.52±3.83 n M。利用纳米金比色法验证适配体的特异性,比对核酸适配体的特异性与亲和力,选出1条与EV71和CA16都具有高亲和力的适配体和1条只与CA16具有高特异性与高亲和力的适配体。对2条适体进行锁式成环,验证环适体对病毒的结合力。建立了单链适体-病毒-环适体的双适体夹心的病毒间接检测方法。滚环扩增后运用纳米金比色法实现检测方法的可视化。该方法的检测时间最短为2小时,最低检测限为1 fmol/L。结论本研究成功筛选到了多条手足口病主要病原的核酸适配体,为两种病毒的检测提供了特异性的探针。建立了基于滚环扩增与纳米金比色法的双适体夹心的可视化病毒检测方法。该方法具有操作简便、特异性强、结果可视化等特点。这证明了核酸适配体在生物检测领域具有非常广阔的前景。