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对虾白斑综合症病毒(White spot syndrome virus, WSSV)属线形病毒科(Nimaviridae)白斑病毒属(Whispovirus),是一种环状双链DNA病毒,能感染对虾、螯虾等各种虾类。该病毒宿主范围广,传染力强,致死率高,是养殖虾类的主要病原。本文对WSSV在虾类血细胞和造血组织细胞中增殖情况进行了相关的研究,并且优化了电镜条件下病毒固定的方法,主要包括了以下几个方面:(1)首先研究了WSSV在活体或离体螯虾的血细胞和造血组织细胞中的增殖情况,主要包括病毒基因组的转录复制和子代病毒的生成。结果表明,病毒侵染两种细胞后,均可以检测到基因组的复制和转录,但在血细胞中病毒基因组复制能力明显低于造血组织细胞,而且基因转录时相也晚于造血组织细胞。电镜结果显示,在血细胞中2h时能观察到有多个病毒粒子在大囊泡中,但是始终没有观察到子代病毒在细胞核中出现。而在造血组织细胞中,2h时观察到单独或几个病毒粒子在小的囊泡中,在12h时的细胞核中开始出现子代病毒,而且随着时间的推移,看到成簇的排列整齐的病毒粒子。(2)研究了病毒进入血细胞和造血组织细胞的方式。电镜观察发现血细胞伸出伪足包围病毒,将其吞入细胞内,然后形成有膜包围的大的吞噬泡。而病毒入侵造血组织细胞时先吸附在细胞的表面,然后细胞膜向内凹陷,包围病毒,形成了小的膜泡,从而进入细胞。此外比较了紫外灭活的病毒、经固定透析灭活的病毒和核衣壳进入两种细胞的情况,发现三者均可被血细胞吞噬进入,而仅有完整的病毒和紫外灭活的病毒可以进入造血组织细胞。结果表明病毒进入血细胞主要借助非特异性的吞噬机制,而病毒入侵造血组织细胞则需要囊膜蛋白介导,说明某种或某些囊膜蛋白在侵染过程中可能发挥了至关重要的作用。(3)纯化的病毒粒子完整性好坏是决定病毒感染效率的关键,电镜是最有效的评估方法,但实际上病毒粒子囊膜对制样过程耐受性较差而常出现囊膜与核衣壳脱离的状况。为了解决这一问题,本论文采用不同浓度的多聚甲醛和戊二醛对纯化的WSSV粒子进行固定,从中寻找最优的固定条件用于病毒的透射电镜分析。实验结果显示,经过多聚甲醛或者戊二醛固定的WSSV粒子对吸附、染色等实验操作的耐受性较未固定样品有显著的提高,在制样过程中没有发生明显的结构破坏。其中1%多聚甲醛常温固定20min对WSSV粒子的结构保持得最好。进一步的分析表明,1%多聚甲醛固定后的病毒粒子更有利于金标免疫电镜的研究。