论文部分内容阅读
目的:探讨脓毒症患者外周血T淋巴细胞亚群程序性死亡受体-1（PD-1）和细胞毒性T淋巴细胞抗原-4（CTLA-4）的表达特征,并分析其与患者病情严重程度及预后的关系。方法:选取2020年10月-2021年9月贵州医科大学附属医院重症监护室（ICU）收治的48例脓毒症患者为脓毒症组,按脓毒症3.0指南中最新诊断标准将脓毒症患者分为一般脓毒症组（n=29）和脓毒性休克组（n=19）,并根据患者28天内预后情况分为存活组（n=36）和死亡组（n=12）,同期选取性别与年龄相匹配的健康体检者为健康对照组（n=20）。收集健康体检者和脓毒症患者确诊后24h内的外周血液样本,并记录患者一般人口学特征、临床特征及实验室检测指标。密度梯度离心法提取外周血单个核细胞（PBMCs）后,应用流式细胞术（FCM）检测T淋巴细胞亚群（CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞、调节性T细胞）百分比、T淋巴细胞亚群（CD4+T细胞、CD8+T细胞）凋亡率及CD4+T细胞、CD8+T细胞、Treg细胞上PD-1和CTLA-4的表达水平。单因素分析应用t检验、x~2检验和秩和检验;Pearson相关性分析指标之间的相关性大小;多因素Logistic回归分析影响脓毒症患者28天预后的独立危险因素;绘制受试者工作特征（ROC）曲线分析相关危险因素对脓毒症患者预后的预测价值;Kaplan-Meier（K-M）生存曲线分析不同指标表达水平与脓毒症患者28天生存率的关系。结果:（1）脓毒症患者28天死亡率为25%,常见原发感染部位主要为肺部感染（占41%）,病原菌感染类型主要为革兰阴性杆菌（占54.29%）,合并的基础疾病以心血管系统疾病多见（占60.42%）。单因素分析显示原发感染部位、病原菌感染类型及合并的基础疾病在脓毒症患者存活组与死亡组之间的差异没有统计学意义（P＞0.05）。（2）与健康对照组相比,脓毒症组淋巴细胞绝对计数（ALC）、CD3+T细胞和CD4+T细胞百分比显著降低（P＜0.01）,而Treg细胞百分比显著升高（P＜0.001）,CD4+T细胞和CD8+T细胞发生凋亡的比例也显著增加（P＜0.001）;与脓毒症患者存活组相比,死亡组ALC、CD4+T细胞百分比降低（P＜0.05）,Treg细胞百分比显著升高（P＜0.01）。（3）与健康对照组相比,脓毒症组CD4+T细胞、CD8+T细胞、Treg细胞PD-1及CTLA-4的表达均显著升高（P＜0.01）;脓毒性休克组CD4+T细胞、Treg细胞PD-1及CTLA-4的表达均高于一般脓毒症组（P＜0.05）。脓毒症患者死亡组CD4+T细胞、Treg细胞PD-1及CTLA-4的表达均高于存活组（P＜0.05）;而CD8+T细胞PD-1及CTLA-4在各组间的表达差异无统计学意义（P＞0.05）。（4）Pearson相关性分析显示,脓毒症患者SOFA评分与CD4+T细胞PD-1、Treg细胞PD-1及CTLA-4的表达呈正相关（r=0.550,P＜0.001;r=0.363,P＜0.05;r=0.446,P＜0.01）;APACHEⅡ评分与CD4+T细胞PD-1、Treg细胞PD-1及CTLA-4的表达也存在正性相关关系（r=0.520,P＜0.001;r=0.363,P＜0.01;r=0.590,P＜0.001）。脓毒症患者CD4+T细胞凋亡率与CD4+T细胞PD-1、Treg细胞PD-1及CTLA-4的表达呈正相关（r=0.476,P＜0.01;r=0.326,P＜0.05;r=0.382,P＜0.01）,CD8+T细胞凋亡率与CD4+T细胞PD-1、Treg细胞CTLA-4的表达呈正相关（r=0.337,P＜0.05;r=0.373,P＜0.01）。（5）多因素Logistic回归分析显示,只有SOFA评分（OR=4.267,P＜0.05）、CD4+T细胞PD-1（OR=1.205,P＜0.05）和Treg细胞CTLA-4的表达（OR=1.325,P＜0.05）是影响脓毒症患者28天预后的独立危险因素。（6）ROC曲线分析显示,SOFA评分、CD4+T细胞PD-1和Treg细胞CTLA-4表达对脓毒症患者28天预后有较好的预测能力（P＜0.01）,其曲线下面积（AUC）分别为0.767、0.756、0.747,最佳截断值分别为6.5分、31.25%、12.64%;当CD4+T细胞PD-1和Treg细胞CTLA-4表达分别与SOFA评分联合检测时的曲线下面积（AUC=0.822,0.813）显著高于任一单独指标（P＜0.001）。（7）K-M生存曲线分析显示,与CD4+T细胞PD-1（≤31.25%）和Treg细胞CTLA-4（≤12.64%）低表达组患者相比,CD4+T细胞PD-1（＞31.25%）和Treg细胞CTLA-4（＞12.64%）高表达组患者的28天生存率降低（P＜0.05）。结论:（1）脓毒症患者外周血CD4+T细胞、CD8+T细胞、Treg细胞PD-1及CTLA-4表达增加,并伴随T淋巴细胞亚群凋亡、CD4+T细胞百分比降低、Treg细胞百分比增加,提示脓毒症患者发病早期已进入免疫抑制状态。（2）CD4+T细胞、Treg细胞PD-1及CTLA-4表达增加与脓毒症患者病情严重程度及预后密切相关。（3）CD4+T细胞PD-1和Treg细胞CTLA-4表达增加是影响脓毒症患者28天预后的独立危险因素,呈高表达患者的死亡风险增加。SOFA评分与CD4+T细胞PD-1、Treg细胞CTLA-4表达的联合检测可进一步提高对脓毒症患者预后的预测价值,提示CD4+T细胞PD-1和Treg细胞CTLA-4表达可能是脓毒症患者预后评估、风险分层及免疫抑制程度识别的有效生物标志物。