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G-CSF动员的供体外周血单个核细胞细胞贴壁后,在含IL-4和GM-CSF的无血清培养基中诱导培养7d,再用IL-10、ATG和TNFa进一步分组诱导2d。收集上清液及细胞,分别用流式细胞术、ELISA、抗原吞噬实验和混合淋巴细胞反应（MLR）测定各组DC的HLA-DR、CD1a、CD11c、CD40、CD80分子表达,IL-12（P70）分泌,抗原吞噬功能以及同种异体反应刺激功能。结果从G-CSF动员的供体外周血中能诱导产生未成熟DC（iDC）,CD1a+DC细胞产率为1.62±0.57×104/2×106PBMCs。iDC经TNFa、IL-10/TNFa和ATG/TNFa分组诱导后:1.与iDC相比,TNFa刺激后,HLA-DR、CD11c、CD40、CD80的表达均明显增高,IL-12分泌增加,同种异体反应刺激能力增强。2.与TNFa刺激组相比,IL-10/TNFa组CD1a表达增高,对应的其他分子表达均明显减弱,IL-12分泌及同种异体反应刺激能力明显减低。3.与TNFa刺激组相比,ATG/TNFa组HLA-DR、CD11c、CD40、CD80表达均明显减弱,IL-12分泌和同种异体反应刺激能力明显减低。4.ATG/TNFa组与IL-10/TNFa组相比,CD1a表达减弱,CD11c、CD80表达明显增高,同种异体反应刺激能力增强。5.iDC经TNFa诱导成熟后,吞噬抗原的能力明显减弱。6.从G-CSF动员的供体PBMCs中诱导产生的iDC,其HLA-DR、CD11c表达明显低于未经动员的健康对照来源的iDC。TNFa刺激后,CD11c、CD40、CD80表达、IL-12分泌和同种异体反应刺激能力均明显低于健康对照。结论1、从G-CSF动员的供体外周血单个核细胞中可以诱导产生iDC,TNF-a能诱导其分化成熟,IL-10、ATG诱导可使其获得致耐受的特性。2、与健康献血员相比,G-CSF动员的供体外周血单个核细胞来源的DC表型相对幼稚,同种异体反应刺激能力较弱。3、尽管从G-CSF动员的供体PBMC中诱导产生CD1a+DC的效率不及未经动员的健康献血员高,但因从动员的供体外周血中可以采集到大量的PBMCs,因此,G-CSF动员的外周血有望成为不同DC的重要来源途径。二、G-CSF动员的供体不同DC亚群免疫生物学特性的研究实验方法用免疫磁珠分离髓细胞来源的DC（MDC）和浆细胞来源的DC（PDC）,并分别用TNFa、CpG2006OND诱导为成熟MDC（mMDC）和成熟PDC（mPDC）。具体的研究方法如下:1.流式细胞术测定各DC亚群的表型;2.MLR测定不同DC亚群同种异体反应刺激能力;3.ELISA测定MLR培养上清液中INF-γ、IL-10的含量,细胞内流式术测定MLR后CD4+T细胞的。INF-γ和IL-4分泌水平;4.流式细胞术和RT-PCR测定MLR后CD4+CD25highT细胞比例和Foxp3mRNA的表达。结果1.分选的MDC纯度＞96%,高表达HLA-DR、CD11c、CD33,中度表达CD4,极低表达CD40、CD45RA、CD80,经TNFa诱导成熟后CD40、CD80表达上调。PDC纯度＞95%,高表达HLA-DR、CD4、CD45RA,极低表达CD11c、CD33、CD40、CD80,经CpG2006OND诱导成熟后CD40、CD80表达上调。2.MDC特别是mMDC具有很强的刺激T淋巴细胞增殖能力,但PDC、mPDC同种异体反应刺激能力很弱。3.mMDC刺激后,T细胞分泌INF-γ水平明显高于MDC和PDC刺激。PDC特别是mPDC刺激后,IL-10明显增高。4.MDC和mMDC刺激后,CD4+T细胞胞浆内IFN-γ的表达均明显高于对照组和PDC刺激组,mMDC刺激组的表达最高。所有刺激组CD4+T细胞内IL-4的表达无明显差异。5.MDC和mMDC对CD4+CD25highTreg无明显影响,PDC则上调Treg,mPDC的作用更为明显;6.Foxp3mRNA的表达在各组间无明显的差别。结论1.采集的供体外周血中两类DC亚群虽然HLA-DR高表达,但仍处于非成熟状态,在合适的条件下分化成熟;无论MDC成熟与否均表现出很强的刺激T细胞增殖能力,可以促进使T细胞分泌IFN-γ增加,其分泌的增加可能是促进向Th1极化的结果。2.PDC可能并不像MDC一样有效地捕获、处理和负载抗原到MHC分子上,因此呈递抗原效率低,表现出对T细胞的弱刺激增殖特性;PDC虽然也可以促进T细胞分泌IFN-γ的分泌,但似乎并非是通过Th1细胞分泌:PDC并不能促进Th2类因子IL-4的分泌,对Th2的极化作用可能表现在IL-10的分泌上。3.PDC有诱导CD4+CD25highTreg的作用。