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酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)和非特异性酯酶(NSE)属于水解酶类,过氧化物酶(POD)属于氧化酶,该四种酶在无特异性免疫的贝类的免疫防御中发挥重要作用。本文利用组织化学和生化测定的方法对海湾扇贝、虾夷扇贝发育过程中ACP、AKP、NSE和POD四种酶进行了定位和定量研究,探讨其发育过程中的免疫防御机制,为预防水产养殖中病害的发生提供理论依据。
组织化学定位结果显示,在海湾扇贝和虾夷扇贝卵、胚胎和幼虫体内均存在ACP、AKP、NSE和POD,根据显示颜色的深浅,定义酶活性为弱阳性、阳性、强阳性、极强阳性。四种酶在海湾扇贝发育过程不同时期的阳性强弱不同:ACP在卵细胞、受精卵、极体期、二细胞期、十六细胞期、三十二细胞期、桑葚期、囊胚和担轮幼虫显示为强阳性,四细胞期、八细胞期和原肠胚显示为极强阳性,早期D形面盘幼虫外套膜、内脏团和面盘处显示为强阳性,其余部位为弱阳性或阳性;AKP在卵细胞、受精卵和极体期显示为强阳性,桑葚期、囊胚、原肠胚和担轮幼虫显示为阳性,二细胞期、四细胞期、八细胞期、十六细胞期和三十二细胞期显示为极强阳性,早期D形面盘幼虫外套膜、内脏团和面盘处显示为强阳性,其余部位为弱阳性;NSE除担轮幼虫显示为阳性外,从卵细胞到囊胚均显示为强阳性,早期D形面盘幼虫外套膜、内脏团和面盘处显示为极强阳性,其余部位为弱阳性或阳性,壳顶幼虫、匍匐幼虫、稚贝的面盘或足、内脏团显示为极强阳性,外套膜为强阳性;POD从卵细胞到囊胚显示为强阳性,原肠胚和担轮幼虫显示为弱阳性。虾夷扇贝胚胎和早期幼虫发育过程中各个时期的ACP、AKP、NSE和POD组化定位显示结果和海湾扇贝基本一致。
生化测定结果显示,在海湾扇贝的壳顶中期幼虫、稚贝和幼贝的匀浆液中均检测到ACP、AKP、NSE、POD四种酶活力,但它们的变化规律不同。ACP酶活力在稚贝中最高,壳顶中期幼虫次之,幼贝最低;AKP和NSE酶活力在这三个时期逐步增高,均为幼贝中酶活力最高,同时三个时期α-丁酸萘酯酶活力都明显高于α-醋酸萘酯酶活力;依赖卤素、不依赖卤素的POD酶活力在稚贝中最高,且含量大体相等,依赖卤素的POD酶活力由高到低为稚贝、幼贝、壳顶中期幼虫,而不依赖卤素的POD酶活力由高到低为稚贝、壳顶中期幼虫、幼贝。