新型核酸荧光探针的合成及其在生物传感器中的应用研究

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生物传感器由于线性范围宽,检测限低等优点,受到科研工作者的广泛关注,核酸荧光探针由于易于合成,稳定性好,免标记等优点受到重视。本论文将结合二者优点,利用核酸荧光探针构建三种生物传感平台定量检测生物分子。论文主要分为四章,内容如下:第一章:主要介绍了生物传感器的概念和分类,同时还简要介绍了荧光方法的原理和影响因素,列举了几种不同的核酸荧光探针,并阐述了其在生物传感器中的应用,最后提出了研究目的和内容。第二章:合成了一种新型的核酸荧光探针N-甲基-2,6-二(4-二甲胺基苯乙烯)吡啶(DMA),基于DNA能够增强DMA的荧光这一原理,构建了检测凝血酶的生物传感器。适配体与凝血酶结合形成G-四链体的结构,阻挡了核酸外切酶I(ExoI)对适配体单链DNA的酶切,DMA作为荧光指示剂,与G-四链体DNA结合产生较强的荧光,依据前后荧光的变化检测凝血酶。实验结果表明,荧光强度与凝血酶在0.1-20.0 μM呈现较好的线性关系,此方法的检测限为22.2 nM(S/N=3),此传感器具有较好的稳定性,选择性与重现性。第三章:合成了一种新型的核酸荧光探针2-吲哚基-3-乙烯-4-(2-喹啉-1-甲基)化碘(E36),基于DNA可以增强E36的荧光这一原理,成功构建了检测生物素的生物传感器。体系中存在生物素时,游离生物素与修饰在单链DNA末端的生物素竞争结合链霉亲和素,使得一部分单链DNA没有和链霉亲和素结合,从而被ExoI酶解,反应体系产生的荧光减弱,根据前后荧光强度的变化检测生物素。实验结果表明,荧光强度与生物素在70.0pM-400.0nM呈良好的线性关系,该方法的检测限达0.03 nM(S/N=3),此传感器具有较好的稳定性,选择性与重现性。第四章:利用E36成功构建生物传感器检测了大肠杆菌RNA,实验结果表明,RNA会增强E36的荧光,在0.2μg/mL-80.0μg/mL之间有良好的线性关系,该方法的检测限达0.044 μg/mL(S/N=3),此外并简要探讨了其与大肠杆菌RNA的结合方式,RNA与E36主要以静电和沟槽结合为主,以嵌插结合为辅,多种结合方式使复合物的荧光更加稳定。
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