本研究用纯化的重组PRV VP6 蛋白作为免疫原,免疫8 周龄BALB/c雌性小鼠,运用淋巴细胞杂交瘤技术, 通过间接ELISA 筛选, 采用有限稀释法,经过4 次克隆筛选,获得了一株稳定分泌抗PRV VP6 的单克隆抗体的杂交瘤细胞株, 命名C5D10。经鉴定C5D10为IgG1亚类,杂交瘤细胞的平均染色体数为93,细胞培养液上清及腹水效价分别为1 : 800 和1 :1 ×106 ,且C5D10单克隆抗体不与猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、猪伪狂犬病病毒发生交叉反应,显示良好的特异性。用抗PRV VP6 蛋白单克隆抗体和PRV 多克隆抗血清对感染PRV 的Marc-145细胞培养物进行了间接免疫荧光检测病原的比较研究:McAb所进行的间接免疫荧光染色后, PRV 感染细胞培养物中多数细胞在其胞浆和细胞膜上出现绿色闪亮荧光,且荧光强度强,未接种病毒的细胞培养物未见有绿色闪亮荧光染色的细胞存在;利用PRV 全病毒制备的抗血清对接种病毒和未接种病毒的细胞培养物进行间接免疫荧光试验表明,接种病毒的细胞培养物染色后,荧光强度强,但未接种PRV 的细胞培养物亦有一定的非特异性荧光反应。结果表明,利用所研制的抗PRV VP6 蛋白McAb进行间接免疫荧光法对病原检测具有很高的特异性。C5D10单克隆抗体与其他腹泻病病毒之间的特异性反应实验及免疫荧光( IFA )实验结果亦表明,所制备的抗猪轮状病毒VP6 蛋白单克隆抗体具有良好的特异性。C5D10单克隆抗体制备成功为PRV疫情监测和准确快速的病原诊断与鉴别诊断奠定了物质基础。