论文部分内容阅读
研究背景及目的
激素受体水平检测在决定乳腺癌患者的治疗方案上起着重要的作用，已成为乳腺癌治疗的常规预测性和预后标记。乳腺癌激素受体检测的方法包括化学法，酶免疫测定法，直接荧光组化法和免疫组织化学（immunohistochemistry,IHC）法。IHC法具有操作简便，可以用于各种组织标本如细针穿刺，细胞学以及肿瘤切除组织中，对标本的量要求小等优点。更重要的是它可以在石蜡组织中检测，能够定位组织中阳性细胞。正是由于这些优点，国内外各实验室都已广泛使用这一方法。随着IHC方法的广泛使用，很多问题也显现出来。其中突出的问题是实验室之间的检测结果可能有差异，染色的标准化水平低，部分实验室对低表达的肿瘤组织的检测存在较多的假阴性结果。为了解决这些问题，需要对影响IHC染色结果的因素进行不断的深入研究，以提高检测的可靠性，实现检测的标准化，提高对诊治的指导性。
本研究目的包括：1．总结ER和PR采用目前的IHC检测方法时在乳腺癌患者中检测结果的频率分布；2．比较经冷冻切片处理的（以下称冻后石蜡标本）和未冷冻过的（以下称冻余石蜡标本）乳腺癌组织间激素受体IHC检测结果的差异；3．应用组织芯片的方法研究不同抗原修复液及修复时间对激素受体IHC检测的影响；4．研究：IHC染色结果评价的重复性。
材料与方法
1．ER和PR在乳腺癌患者中IHC检测结果的频率分布：选取四川大学华西医院2004年11月~2005年8月常规进行了激素受体IHC检测的经福尔马林固定石蜡包埋的乳腺癌标本267例。提取IHC切片，重新评价染色的阳性细胞比例及阳性强度，进行Q评分并进行频数分析。
2．冻后石蜡标本和冻余石蜡标本间激素受体IHC检测结果的比较：从四川大学华西医院病理科2005年进行术中冰冻诊断的乳腺癌中选取21例，每例选择两个蜡块，分别为冻后和冻余的经福尔马林固定石蜡包埋的组织，共42个石蜡块。在两种抗原修复条件下，对冻后石蜡组织和冻余石蜡组织同时进行ER和PR免疫组化染色。盲法结果评价，应用配对t检验、Wilcoxon符号秩和检验和Pearson相关分析对结果进行统计分析。
3．不同抗原修复液及修复时间对激素受体IHC检测的影响：选取四川大学华西医院病理科20例确诊为乳腺癌的标本，共20个福尔马林固定石蜡包埋蜡块，制作组织芯片。研究5种抗原修复液对染色的影响，每种修复液设5个修复时间段（10~30min）。盲法结果评价，应用重复资料的方差分析对结果进行统计分析。并评价组织芯片染色结果与原始华西医院病理科IHC染色结果的一致性。
4．IHC染色结果评价的重复性：随机选取20例乳腺癌ER IHC切片。由两位病理医师分别进行结果评价，分别评估采用阳性细胞比例≥10％和≥1％为阳性界值，Q值等结果评价方法的重复性。
结果
1．ER和PR在乳腺癌患者中的IHC检测结果的频率分布
（1）ER的染色：39．3％的肿瘤完全没有细胞核的染色。42．3％的肿瘤中，有50％或更多的肿瘤细胞显示ER的细胞核阳性着色。以阳性细胞比例≥10％，≥1％和Q值≥3为阳性界值，ER阳性频率分别为54．7％，60．7％，60．7％。
（2）PR的染色：25．1％的肿瘤完全没有细胞核的染色。53．9％的肿瘤中，有50％或更多的肿瘤细胞显示PR的细胞核阳性着色。以阳性细胞比例≥10％，≥1％和Q值≥3为阳性界值，PR阳性频率分别为68．2％，74．9％，74．9％。
2．冻后石蜡标本和冻余石蜡标本间激素受体IHC检测结果的比较
冻后石蜡标本与冻余石蜡标本在两种抗原修复方法下ER染色平均阳性细胞比例分别为72．9％与70．1％，58．4％与63．0％。两种类型标本ER染色阳性细胞比例没有显著性差异（P>0．5）并具有显著正相关性（P<0．05）。冻后石蜡标本与冻余石蜡标本在两种抗原修复方法下ER染色平均Q值分别为6．62与6．33，5．52与5．43。两种类型标本ER染色Q值没有显著性差异（P>0．5）并具有显著正相关性（P<0．01）。
冻后石蜡标本与冻余石蜡标本在两种抗原修复方法下。PR染色平均阳性细胞比例分别为56．0％与56．4％，49．7％与50．1％。两种类型标本PR染色阳性细胞比例没有显著性差异（P>0．5）并具有显著正相关性（P<0．001）。冻后石蜡标本与冻余石蜡标本在两种抗原修复方法下PR染色平均Q值分别为5．90与5．86，5．76与5．76。两种类型标本PR染色Q值没有显著性差异（P>0．5）并具有显著正相关性（P<0．001）。
3．不同抗原修复液及修复时间对激素受体IHC检测的影响
激素受体IHC染色结果随抗原修复液以及修复时间的不同而发生变化。可以获得最好染色结果的两种抗原修复液为PH3．0柠檬酸盐缓冲液和PH9．0Tris-EDTA。ER在这两种抗原修复液下修复30min时平均阳性细胞比分别为38．0％和36．0％，统计分析具有显著性差异（P<0．05）；PR在这两种抗原修复液下修复30min时平均阳性细胞比例分别为35．0％和37．4％，统计分析不具有显著性差异（P>0.05）。对低表达的肿瘤组织，ER使用PH3.0柠檬酸盐缓冲液可以获得最好的染色结果。在相同的抗原修复条件下，组织芯片ER和PR染色结果与华西医院病理科原始结果之间仅各有一例差异较大。
4.IHC染色结果评价的重复性
分别以阳性细胞比例≥10％和≥1％为阳性界值时，两位病理医师之间的评价结果一致性kappa值为0.643和1。当使用Q值评价结果时，两位病理医师间评价结果一致性kappa值为0.599。
结论
1．IHC检测ER（colon SP1）和PR（colon SP2）的表达水平在乳腺癌人群中呈双峰分布。观察者之间对结果的评价重复性较好。
2．冻后组织和冻余组织ER和PR的染色结果没有显著差异。
3．ER检测的较好的抗原修复液是PH3.0柠檬酸盐缓冲液；PR检测的较好的抗原修复液是PH3.0柠檬酸盐缓冲液和PH9.0 Tris-EDTA。抗原修复时间应不少于修复时间30min。
4．组织芯片的染色结果与常规切片一致性好，可用于免疫组化的质控研究。