论文部分内容阅读
目的：比较富碘中药复方与碘过量对碘缺乏NOD.H-2h4小鼠甲状腺IL-23/IL-17炎症轴的影响。材料与方法：选雌性8周龄NOD.H-2h4小鼠，给低碘饲料，饮双蒸水，喂养90天后制成自身免疫甲状腺炎易感碘缺乏甲状腺肿模型后随机分成4组：正常对照组(NC)、模型对照组（MC）、富碘中药复方组[（HIE）,海藻15g﹑昆布15g﹑海带7.5g,碘含量1900.36μg/L，常规水煎服,浓缩汤剂使生药浓度为100%,按与人相同体表面积折算灌服药剂量,生药含量4.7g/(Kg·d)]、碘过量组[（IE）含碘1900μg/L的去离子水，用碘酸钾配制]。再给处理因素90天后处死小鼠。放射免疫分析法（RIA法）测小鼠血清总T3（TT3）、血清总T4（TT4）。IRMA法测定小鼠血清促甲状腺激素（TSH）。光镜下观察甲状腺细胞形态。用免疫组化方法测定甲状腺间质细胞CD68及甲状腺组织中IL-17的表达。实时定量(RT-PCR)法检测NOD小鼠甲状腺IL-17和IL-23mRNA表达。Western blot蛋白印迹杂交法测定小鼠甲状腺IL-17和IL-23的表达。结果：1.给处理因素90天后，小鼠甲状腺功能测定结果:正常对照组(NC)血清TSH（1.14±0.23mUI/L），血清TT3（2.24±0.54nmol/L），血清TT4（90.86±9.35nmol/L）。模型对照组(MC)血清TSH（1.33±0.13mUI/L），血清TT3（2.36±0.72nmol/L），血清TT4（167.68±68.74nmol/L）。碘过量组(IE)血清TSH（1.33±0.07mUI/L），血清TT3（2.44±0.85nmol/L），血清TT4（117.79±21.98nmol/L）。富碘中药复方组(HIE)血清TSH（1.24±0.25mUI/L）,血清TT3（3.35±0.54nmol/L），血清TT4（130.46±42.85nmol/L）。可见小鼠各组间血清TT3，血清TT4及血清TSH相比较及和正常对照组相比较均无明显差异（P﹥0.05）。2.光镜下观察结果:正常对照组(NC)；甲状腺上皮细胞呈立方状，滤泡腔呈较均匀的中等大小，腔内胶质丰富均匀，给处理因素90天时10只小鼠有2只(2/l0)自发甲状腺炎,且炎症反应轻微，其他则无甲状腺炎发生。模型对照组(NC)；甲状腺组织形态变化并不明显，甲状腺滤泡大小不一，在中央部分大小适中，较为均匀一致，周边一些滤泡较大，滤泡上皮细胞为高柱状，核圆形或椭圆形，滤泡腔内有中等量的粉红色胶质，在给处理因素90天时，有1只小鼠仅表现为胶质性甲状腺肿外，其余9只均未发生甲状腺炎（0/10）。碘过量组(IE)；滤泡腔增大,胶质充盈,上皮细胞挤压变扁,甲状腺出现炎症细胞浸润,且浸润面积占总面积的50﹪左右,在给处理因素90天时10只小鼠除了1只未发生甲状腺炎外,其余9只均发生甲状腺炎(9/10)。富碘中药复方组(HIE)；甲状腺滤泡大小不一，滤泡上皮细胞呈高柱状或立方状，滤泡腔内胶质充盈，在给处理因素90天时，虽然有炎性细胞浸润，但浸润面积较小,并且10只小鼠只有3只发生甲状腺炎(3/10)。此结果表明富碘中药复方组与碘过量组相比较NOD小鼠自身免疫甲状腺炎的发生率可明显降低，证明了富碘中药复方未与碘过量一样加重自身免疫甲状腺炎淋巴细胞的浸润。3.免疫组化测定结果:给处理因素90天后，与碘过量组(IE)相比较，富碘中药复方组(HIE)小鼠甲状腺间质细胞CD68的表达水平(整合光密度0.13±0.06vs0.28±0.07)明显降低（P﹤0.01）；富碘中药复方组(HIE)小鼠甲状腺组织中IL-17的表达水平（整合光密度0.19±0.05vs0.21±0.07）明显降低（P﹤0.01）。由此可见，小鼠甲状腺间质细胞CD68及甲状腺组织中IL-17的表达,富碘中药复方组(HIE)较碘过量组(IE)明显降低（P﹤0.01）。4.RT-PCR测定结果：富碘中药复方组（HIE）IL-17mRNA及IL-23mRNA平均相对表达量(1.31±0.06，1.43±0.50)，明显低于IE组（2.39±0.05，2.21±0.70）,P均<0.05。5.Westernblot结果：富碘中药复方组（HIE）的IL-17及IL-23的蛋白表达量（0.73±0.02，0.27±0.02）,明显低于碘过量（IE）组(0.80±0.03，0.36±0.03),P均﹤0.05。结论：与单纯碘过量相比，富碘中药复方能明显降低碘缺乏NOD.H-2h4小鼠碘致自身免疫甲状腺炎的发生率，其机理可能与富碘中药复方能明显抑制碘补充过程中甲状腺内IL-23、IL-17的高表达有关。