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目的:研究AKT/c-Met共表达诱导的肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)小鼠模型中NF-κB信号通路对小鼠HCC的发生发展的作用,探讨NF-κB相关信号通路对HCC的影响。用雷公藤红素对AKT/c-Met小鼠HCC模型进行干预,观察雷公藤红素对小鼠HCC模型中NF-κB表达水平的影响。方法:1、AKT/c-Met共表达促进NF-κB信号通路的激活采用野生型FVB/N小鼠32只,随机平均分成4组,AKT组,c-Met组和AKT/c-Met组运用SB介导的高压尾静脉转染技术注射相应质粒,WT组注射等体积生理盐水。造模6W后,眼眶静脉丛取血,测定各组小鼠血清中AST和ALT含量。麻醉情况下将小鼠处死,剥离肝脏组织,拍照,称重记录。取一部分小鼠肝脏组织用4%多聚甲醛固定。组织包埋切片HE染色后,在显微镜下观察。另一部分组织-80℃保存,并通过Western Bloting检测NF-κB及IL-6、TNF-α、COX-2和PGE2表达水平。2、雷公藤红素调控NF-κB信号通路抗AKT/c-Met共表达诱导小鼠肝细胞癌初步研究32只野生型FVB/N小鼠随机分成4组:正常组(WT)、AKT/c-Met模型组、雷公藤红素低剂量组(AKT/c-Met-Cel-1)、雷公藤红素高剂量组(AKT/c-Met-Cel-2)。造模4周后给予雷公藤红素进行干预,连续3周(腹腔给药,1和2 mg/kg/天)。给药结束后,麻醉情况下将小鼠处死,剥离肝脏组织,拍照,称重记录。用Western Bloting检测雷公藤红素给药后HCC小鼠肝组织中PCNA和NF-κB及相关蛋白水平变化。3、雷公藤红素对体外HCC细胞生长中的NF-κB信号通路的影响将人源肝癌细胞HepG2和SMMC-7721在含5%胎牛血清的H-DMEM培养液中培养,细胞密度达到80%时,提取细胞蛋白,检测细胞中NF-κB的表达水平,结果进行对比分析。NF-κB表达较高细胞直接进行雷公藤红素干预研究,NF-κB表达较低细胞先进行AKT/c-Met质粒转染,然后给予雷公藤红素干预;并考察不同给药时间和不同给药浓度对细胞的影响。雷公藤红素干预结束后,提取细胞蛋白,采用Western Bloting检测细胞中NF-κB等相关蛋白的表达水平。结果:(1)转染6周后,AKT组小鼠肝组织有脂肪变性,c-Met组小鼠肝组织无异常,但是AKT/c-Met组肝脏表面肉眼可见大小不等的灰白色,切面呈多结节状,小鼠肝脏病理组织学结果示为肝细胞癌。与正常组对比,AKT组、c-Met组和AKT/c-Met组的ALT、AST均显著升高,具有统计学差异(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。与正常组相比,AKT/c-Met组的NF-κB的表达量显著升高,差异有统计学意义(P<0.001)。(2)与模型组对比,雷公藤红素低、高剂量组肝重下降(P<0.05)。与模型组对比,雷公藤红素低、高剂量组肝组织中NF-κB蛋白表达降低(P<0.01,P<0.001)(3)SMMC-7721细胞中NF-κB蛋白表达水平低于HepG2细胞中的NF-κB蛋白表达水平。雷公藤红素抑制了SMMC-7721,HepG2细胞中NF-κB,TNF-α蛋白的表达。结论雷公藤红素能抑制AKT/c-Met诱导的HCC小鼠模型发生发展,该作用可能是通过抑制NF-κB信号通路。