酪蛋白酶促水解过程集总动力学研究

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蛋白酶促水解反应是在酶的催化作用下使蛋白水解生成胨、肽等低分子量产物的生化过程。本文利用集总方法对酪蛋白-胰蛋白酶(Casein-trypsin)水解体系进行了动力学及过程模拟研究,建立了该体系的四集总动力学模型,并对模型进行了参数估算和实验验证,主要内容包括以下几方面:首先,考察了操作条件对酪蛋白水解速度的影响,确定酶解反应初态pH值为8.0,采用直接加入酶粉法;低浓度下胰蛋白酶以热失活为主,水解反应存在最适温度、pH值以及底物和酶浓度比。其次,确定反应灭酶方式为沸水灭酶,色谱检测波长为214nm,水解过程不需要加入胰蛋白酶保护剂;进一步采用高效体积排阻色谱法定性分析胰蛋白酶水解酪蛋白的反应全过程,发现水解产物主要集中于九个色谱峰中,初始反应速度较快,分子量大的多肽不断水解生成分子量较小的多肽,随反应时间的延长,产物分布趋于稳定。最后,以分子量作为标准将反应体系分为四个集总,其中包括一个不溶性组分和三个可溶性组分。通过色谱分析,建立了可溶性组分质量浓度与吸收峰面积之间的线性关系,进而得出随时间变化的水解物浓度分布。在合理假设的基础上,建立了四集总动力学模型。通过测定各集总组分的本征动力学常数,估算出集总模型的反应速率常数。并通过改变实验条件对模型进行了拟合验证,实验值与模型计算值的平均误差为11.6%,说明该模型可实现对蛋白质复杂酶解反应过程的模拟,但参数拟合方法及过程的假设上仍有待进一步完善与改进。全文研究表明,对于蛋白酶促水解复杂反应体系,集总是一种有效的动力学研究方法,并可望用于其它生化复杂反应体系,但其不足之处亦需进一步研究解决。
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