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目的:基于CRISPR-Cas12系统与恒温扩增技术,创新性建立4T系统(4thermostatic system),即恒温提取核酸、恒温扩增序列、恒温剪切靶标、恒温检测片段,探索一种操作便利、灵敏性好、准确性高的新型冠状病毒核酸检测方法。方法:1.从Gen Bank获得新型冠状病毒N基因,并通过Primer Premier 5进行比对分析,得到新型冠状病毒的保守基因序列。2.针对新冠病毒N基因检测靶点设计3对特异性引物和3个cr RNA,通过构建RT-TSA反应体系和DNA凝胶电泳检测扩增情况,最终选出扩增效果最好的引物对;通过CRISPR荧光检测,选择荧光激活效果最佳的cr RNA。3.基于RT-TSA恒温扩增和CRISPR-Cas12a技术建立一种快速检测新冠病毒核酸体系,通过设计两端带有特殊标记的ss DNA报告基因,使检测结果可通过荧光信号或横向侧流试纸条显色读出,根据该检测体系进行装置设计,并对该装置进行特异度和灵敏度的评价。4.收集27例新型冠状病毒临床样本,使用基于RT-TSA恒温扩增和CRISPR、横向侧流试纸条建立的新型冠状病毒核酸检测装置进行检测,进一步评估该检测方法的临床应用价值。结果:1.针对新型冠状病毒N基因,筛选得到了最佳引物对和cr RNA,基于RT-TSA恒温扩增和CRISPR技术、横向侧流试纸条,探索得到一种新型冠状病毒核酸检测装置。2.探索的新冠核酸检测装置特异性好,与其他病毒无交叉反应,在40分钟内检测下限为10拷贝/微升。3.对27例新型冠状病毒临床样本检测结果显示,探索的新冠核酸检测装置与RT-q PCR方法检测结果具有良好的一致性。结论:1.基于RT-TSA恒温扩增和CRISPR-Cas12a技术,创新性建立4T系统,实现新冠病毒N基因快速、简便、高灵敏、高特异的核酸检测,为临床检测新冠病毒提供一种新方法。2.探索一种检测新冠病毒的便携式使用装置,按操作流程能简便、快速检测新冠病毒存在,具有重要的经济和社会价值。