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研究背景:脓毒症是指由感染引发的全身炎症反应综合征,本质上是机体对感染性因素的反应。虽然脓毒症由感染引起,但一旦发生,其病情发展遵循自身的病理过程和规律。脓毒症病情凶险,病死率高,目前其发病机制尚未完全阐明,临床上尚无良好的治疗方案。脓毒症作为一种严重的免疫炎症反应,有报道表明,在B细胞缺陷小鼠中,由细菌感染引发的脓毒症小鼠动物模型死亡率显著升高。这提示我们,B细胞有可能通过抑制炎症反应对细菌感染引发的脓毒症起到保护作用。具有抑制免疫炎症反应功能的B细胞被称为调节性B细胞(Regulatory B cell,Breg)。目前,有多个B细胞群体被称为Breg,其中,CD5+CD1dhi Breg亚群作为较早被确定为有免疫抑制功能的细胞群体之一而被广泛研究。Breg在多种自体免疫性疾病、感染和肿瘤等疾病的发生发展过程中起着重要的调节作用,对其研究,将有助于深入阐述多种临床疾病的发病机制及治疗方案。那么,Breg细胞在脓毒症疾病的发展过程中扮演了怎样的角色?然而,迄今Breg与脓毒症的关系未有明确的研究,CD5+CD1dhi Breg亚群与脓毒症的关联未有报导。目的:研究脓毒症小鼠中脾脏免疫抑制性细胞CD5+CD1dhi Breg亚群及其免疫调节功能相关分子、免疫调节功能变化情况,Breg是否对脓毒症具有治疗意义;从而深入阐明脓毒症的发病机制,为临床上脓毒症的治疗提供依据。方法:采用腹腔注射不同剂量脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)或盲肠结扎穿刺(CLP)构建不同严重程度的小鼠脓毒症模型,取其外周血,Elisa法检测血中IFN-γ含量变化;无菌分离脾细胞或脾脏CD19+B细胞,流式细胞术检测CD5+CD1dhi Breg亚群及其相关功能分子CD25、CD86、FasL、IL-10等表达变化情况。通过流式分选脓毒症小鼠CD5+CD1dhi Breg亚群,与CD4+T细胞共培养,检测其抑制CD4+T细胞增殖情况,判断脓毒症小鼠CD5+CD1dhi Breg亚群免疫抑制功能变化。最后,将分选的IL-10表达的CD5+CD1dhiBreg亚群过继性转移至脓毒症小鼠体内,观察其对脓毒症的治疗作用。结果:1.脓毒症小鼠脾脏CD5+CD1dhi Breg亚群比例降低;2.LPS诱发的脓毒症小鼠脾脏细胞CD5+CD1dhi Breg亚群CD25、CD86、FasL表达升高,提示其处于活化状态,参与到了机体的免疫反应中;3.重度脓毒症小鼠脾脏CD5+CD1dhi Breg亚群IL-10分泌降低,轻度脓毒症小鼠脾脏CD5+CD1dhi Breg亚群IL-10分泌升高,提示重度脓毒症小鼠可能因为CD5+CD1dhi Breg亚群分泌的IL-10减少引发免疫抑制功能缺陷;4.重度脓毒症小鼠脾脏CD5+CD1dhi Breg亚群免疫抑制功能减弱;5.过继性转移CD5+CD1dhi Breg亚群后脓毒症小鼠死亡时间延迟结论:在小鼠脓毒症中,CD5+CD1dhi Breg亚群数目减少;IL-10分泌的CD5+CD1dhi Breg在重度的脓毒症模型中出现了降低;并出现了免疫抑制功能的缺陷,该缺陷可能与其Breg激活后IL-10分泌下调有关;活化后分泌IL-10的CD5+CD1dhi Breg亚群对重度脓毒症小鼠具有保护作用,可延长其生存时间。研究表明,该Breg亚群不仅参与脓毒症的发病过程,并且对脓毒症具有治疗作用。