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目的:通过检测不同程度肾间质纤维化患者肾组织及血、尿中PDGF-BB、TGF-β、α-SMA等指标,探讨PDGF-BB促肾间质纤维化的机制和意义;寻找方便临床检测的监测肾间质纤维化的指标;寻找防治肾间质纤维化的新途径。
方法:
1.通过肾活检收集20例IgA肾病患者的肾组织病理标本及其相对应的血、尿标本。入组病例选择:纳入标准:IgA肾病患者。排除标准:1、伴有急性肾功能衰竭者;2、有慢性肝炎或肝硬化病史;3、有肿瘤病史;4、紫癜性肾炎等继发性IgA肾病。
2.肾组织行HE、PAS、Masson染色,光镜下观察其病理改变,根据Banff分级,将不同程度肾间质纤维化的肾组织标本分为四组(每组5例):对照组、实验组(轻、中、重)。并行免疫荧光、电镜检查。(分组方法:根据Banff分级将Masson染色光镜下肾小管萎缩及间质纤维化病变程度半定量分为4级。0级:肾小管及肾间质正常(对照组);1级:病变范围＜25％(轻);2级:病变范围26％-50％(中);3级:病变范围＞50％(重)。)
3.肾组织免疫组化染色:采用SABC法检测PDGF-BB、PDGFR-β、TGF-β及α-SMA的表达,用Image-Pro Plus6.0病理图像分析软件测定计算各观测指标的平均光密度。
4.采用酶联免疫吸附法检测相对应患者的血清和尿液的PDGF-BB及RBP等指标,鸡氨酸氧化酶法检测血清肌酐水平,生化比色法检测患者的尿NAG酶,并进行分析。
5.实验数据采用SPSS16.0统计分析软件进行计算分析得出结论。两组间比较使用H检验。各观测指标间作spearman秩相关性分析。P＜0.05有统计学意义。
结果:
1.肾组织免疫组化结果:(1)PDGF-BB及PDGFR-β可见在肾小管上皮细胞胞浆呈阳性表达,肾间质区仅少量表达,PDGF-BB及PDGFR-β的表达强度随着肾间质纤维化严重程度的增加而增高,在肾间质纤维化肾组织中PDGF-BB及PDGFR-β的表达明显高于对照组(P＜0.01)。Α-SMA可见在肾小管上皮细胞胞浆、肾间质细胞胞浆及血管壁有阳性表达。且其表达强度与肾间质纤维化程度呈正相关,在肾间质纤维化组织中α-SMA的表达明显高于对照组(P＜0.01)。TGF-β可见在近曲小管上皮细胞胞浆及胞膜阳性表达。且其表达强度与肾间质纤维化程度呈正相关,在肾间质纤维化组织中TGF-β的表达明显高于对照组(P＜0.05)。(2)随着α-SMA平均光密度的增高,PDGF-BB的平均光密度亦上升,两者的表达呈正相关(P＜0.01,spearman相关系数为0.998)。随着α-SMA平均光密度的增高,PDGFR-β的平均光密度亦上升,两者的表达呈正相关。PDGF-BB及PDGFR-β的平均光密度随着TGF-β平均光密度的增高亦而增高,PDGF-BB与TGF-β两者的表达呈正相关,PDGFR-β与TGF-β两者的表达呈正相关。PDGF-BB及PDGFR-β的表达呈正相关。
2.1对照组血PDGF-BB的浓度是182.25±24.90pg/ml,实验组血PDGF-BB的水平分别是是271.51±27.38pg/ml、330.34±35.27 pg/ml、499.52±73.00pg/ml,实验组各组的患者血清PDGF-BB水平显著高于对照组(P＜0.05);实验组中随着肾间质纤维化程度加重而表现患者血清PDGF-BB水平增高,两者关系呈正相关。
2.2对照组患者尿PDGF-BB的浓度是1924.2±577.30pg/ml。实验组尿PDGF-BB的水平分别是是3643.2±865.99pg/ml,5301.0±462.03pg/ml,7157.0±1433.99pg/ml。实验组各组的患者尿液PDGF-BB水平显著高于对照组(P＜0.05);实验组中随着肾间质纤维化程度加重而表现患者尿液PDGF-BB水平增高,两者关系呈正相关。
2.3所观察病例的肾组织PDGF-BB表达与血PDGF-BB水平呈正相关,与尿PDGF-BB水平呈正相关。肾组织PDGFR-β表达与血PDGF-BB水平呈正相关,与尿PDGF-BB水平呈正相关。
3.肾组织PDGFR-β的表达与尿RBP水平两者呈正相关;PDGFR-β的表达与尿NAG酶水平两者无相关性;PDGFR-β的表达与血肌酐水平两者呈正相关。肾组织PDGF-BB的表达与尿RBP水平两者呈正相关;PDGF-BB的表达与尿NAG酶水平两者无相关性;PDGF-BB的表达与血肌酐水平两者呈正相关。
结论:
1.在肾纤维化肾组织中,PDGF-BB、PDGFR-β、TGF-β和α-SMA在肾小管表达显著增加,并随着纤维化程度加重而表达增加,提示PDGF-BB、TGF-β和α-SMA是肾小管间质纤维化的重要致病因子,多种因子同时表达增加,提示存在多种因子相互间的网络作用。
2.肾组织PDGF-BB和PDGFR-β的表达与血、尿PDGF-BB水平正相关,提示血、尿PDGF-BB变化可反映肾间质纤维化的严重程度,血、尿PDGF-BB测定可作为临床监测肾间质纤维化的指标。
3.尿NAG酶水平不能反映肾间质纤维化的严重程度。尿RBP变化只能粗略的反映肾间质纤维化的程度。