论文部分内容阅读
肿瘤转移是导致恶性肿瘤患者死亡的主要原因,抑制癌细胞的迁移和侵袭一直是研究的热点。淋巴结转移是大部分实体肿瘤扩散的早期事件,也是黑色素瘤和乳腺癌等肿瘤转移的主要途径。被膜下窦巨噬细胞(subcapsular sinus macrophage,SCS巨噬细胞)是淋巴结固有的巨噬细胞,该类细胞定居于淋巴结被膜下的皮窦,其表面特异性高表达唾液酸粘附素(siglec-1,CD169)。SCS巨噬细胞主要通过过滤输入淋巴液捕获抗原并将其呈递给细胞毒性T细胞(CTL),分泌一系列细胞因子激活自然杀伤细胞(natural killer cell,NK)和促使Thl细胞分化进而发挥抗肿瘤的效果。CpG 作为一种寡脱氧核苷酸(oligodeoxynucleotides,ODN),其特殊的序列可以激活 TLR9(Toll-likereceptor 9)相关的信号通路,从而激活下游的一系列的抗肿瘤免疫反应。理论上通过药物治疗破坏淋巴结中的免疫抑制环境,恢复淋巴结固有的免疫应答体制可以达到阻断肿瘤经淋巴结转移的目的。在研究中,我们构建的核酸输送系统是由一种由阳离子修饰的琼脂糖(agarose)材料形成的水凝胶与核酸药物CpG组成的复合物,其中琼脂糖主要由半乳糖组成。SCS巨噬细胞表面富含有CD169分子,而该分子与半乳糖残基具有较高的亲和性。体内分布实验的结果显示,该载体主要将CpG输送进淋巴结中的CD169巨噬细胞中。体外实验结果显示,C-agarose能将CpG高效地输送进CD169巨噬细胞中,并且这种高效输送作用主要依赖于CD169分子。细胞实验结果显示,CpG上调白细胞介素1β(Interleukin 1 beta,IL-1β)、肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factor alpha,TNF-α)和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(Granulocyte-macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)的表达;流式结果提示CpG上调了 T细胞、树突状细胞(Dendritic Cells,DC)和NK的比例,并促进细胞因子干扰素γ(Interferon gamma,IFN-y)、白细胞介素2(Interleukin-2,IL-2)及颗粒酶B(GranzymeB,Gzms-B)的表达。在4T1乳腺癌及B16黑色素瘤小鼠模型体内实验中,在C-agarose&CpG给药后,检测淋巴结组织中免疫细胞亚型及细胞因子的变化,结果与细胞实验一致,发现T(CD4/CD8)细胞、DC(CDllc)细胞和NK(CD49b)细胞的比例上升,并增加了 IL-1β、TNF-α、GM-CSF、IFN-y、IL-2及Gzms-B的表达。同时C-agarose&CpG组可以有效抑制肿瘤的转移,延长小鼠的存活时间。综上所述,基于将CpG靶向递送至淋巴结的给药体系,可以显著阻断肿瘤经淋巴结的转移。此类针对淋巴结的非手术介入的给药策略可为阻断肿瘤的淋巴转移提供全新的治疗思路,具有良好的临床应用前景。