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猪圆环病毒2型（Porcine circovirus type2，PCV2）是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原，而且还与猪皮炎与肾炎综合症（PDNS）、猪先天性脑震颤（CT-AII）、增生性坏死性肺炎（PNP）等疾病的发生有一定的关联。该病毒感染猪体后能够导致机体免疫功能抑制，并且容易诱发双重或多重感染，使病情复杂化，严重影响了养猪业的健康发展。PCV2含有两个主要的开放阅读框(Open reading frame，ORF)，其中ORF2基因编码的核衣壳（Cap）蛋白，是病毒主要的结构蛋白，可以刺激机体产生一定的免疫保护反应，并且PCV1与PCV2的Cap蛋白氨基酸的同源性比较低，两者之间不存在血清交叉性反应。因此Cap蛋白在血清学诊断及基因工程亚单位疫苗研究中具有重要意义。 本研究分别利用原核表达系统和杆状病毒表达载体系统（BEVS）对PCV2 Cap蛋白进行表达，并对其进行免疫原性分析。 首先，进行了PCV2 Cap蛋白在大肠杆菌——原核系统表达的研究。根据 GenBank中公布的PCV2 WH株（FJ598044）ORF2基因序列设计一对引物，以PCV2 WH株基因组 DNA为模板,扩增出去核定位信号( Nuclear localization signal，NLS)的ORF2基因，将其插入到原核表达载体 pET-32a(+)中，获得重组表达载体 pET32a-Cap579，然后将其转化到宿主菌 BL21(DE3)中，经IPTG诱导表达，对诱导表达产物进行SDS-PAGE和Western Blotting检测分析，结果表明 PCV2 Cap579蛋白获得了表达，蛋白分子量大小约为40 kDa，主要以可溶性的形式存在，且具有良好的反应原性。纯化后测得重组Cap579蛋白的浓度大约为200μg/mL，将其免疫新西兰大白兔，3次免疫获得抗Cap579蛋白的高效免疫血清。 其次，进行了PCV2 Cap蛋白在 Sf9昆虫细胞——真核系统表达的研究。为了提高PCV2 Cap蛋白在Sf9细胞中的表达量，人工优化合成适用于杆状病毒表达的PCV2 ORF2基因，并将目的基因插入到杆状病毒转移载体pFastBacTMHTA中，获得重组杆状病毒转移载体 pFastBacTMHTA-cap2，将其转化到DH10Bac感受态中，经抗性及蓝白斑筛选，得到含ORF2基因的重组穿梭载体 rBacmid-Cap2，转染该质粒至对数生长期的S f9昆虫细胞中，即可获得 rBac-cap2重组杆状病毒，并对病毒进行扩增。分别用连续稀释法和间接免疫荧光法(Indirect immunofluorescence assay，IFA)对重组杆状病毒的滴度进行测定，结果显示，这两种方法测得的P3代病毒的滴度分别为1.64×108 pfu/mL、1.01×108 pfu/mL，说明这两种方法都可以用于病毒滴度的测定。Western-blotting及SDS-PAGE结果表明，目的蛋白在昆虫细胞中获得了表达，其蛋白分子量大小约为32.5 kDa，IFA结果表明，表达的重组蛋白可被猪抗 PCV2特异性血清所识别。以感染复数(Multicity of infection，MOI)为2的条件下感染 Sf9细胞，能够获得最优的蛋白表达量。最后，进行了重组PCV2 Cap蛋白免疫抗体动态测定。将在Sf9细胞中表达的重组PCV2 Cap蛋白免疫小鼠，并对免疫小鼠血清抗体进行动态检测，实验结果表明，首免后两周即可检测到特异性抗体，加强免疫后三周抗体仍有继续上升的趋势。对免疫后第三周和第六周的小鼠血清，与PCV2 WH株进行病毒中和实验，结果显示，重组蛋白免疫组在第三周时平均中和抗体效价为1：7.17，加强免疫后，在第六周时平均中和抗体效价进一步提高，达到1：12.6。 综上所述，本研究成功利用了原核表达系统和杆状病毒表达系统对PCV2 Cap蛋白进行了表达，且所获得的Cap蛋白具有良好的免疫原性，这为进一步建立PCV2的快速检测方法及基因工程亚单位疫苗的研制奠定了基础。