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背景:心肌肥大表现为心肌质量的增加,是机体在压力超负荷状态和应对外界刺激时所做出的适应性反应,持续的心肌肥大会导致心律失常,心力衰竭甚至猝死。作为多种心血管疾病的独立危险因素,预防和治疗心肌肥大对于保护心肌,预防心力衰竭等心血管疾病的发生具有重要意义。菊科植物灯盏花,有多年用药历史,临床用于治疗冠心病、脑梗死、脑栓塞等多种心脑血管疾病,灯盏花中的主要活性成分野黄芩素具有较高的生物利用度和溶解度,并具有抗炎和抗氧化的功效,但是野黄芩素在心肌肥大方面的研究较少。
目的:通过观察野黄芩素对PE诱导的H9c2和AC16心肌细胞表面积大小和心肌肥大标志物的影响,探讨野黄芩素是否可以保护PE诱导的心肌肥大,并初步研究作用的分子机制,为心肌肥大的预防和治疗提供参考。
方法:
(1)体外培养H9c2和AC16细胞,用不同浓度的野黄芩素处理后用CCK-8进行细胞活力检测。
(2)细胞分组及处理:体外培养细胞并分组:对照组、PE组(50μMPE)、PE+低剂量野黄芩素组(50μMPE+10μM野黄芩素)、PE+中剂量野黄芩素组(50μMPE+50μM野黄芩素)和PE+高剂量野黄芩素组(50μMPE+100μM野黄芩素)
(3)对H9c2和AC16细胞的骨架和核染色,在荧光显微镜下观察细胞并用ImageJ软件测量各处理组细胞表面积大小。
(4)通过RT-qPCR对各处理组细胞中ANP、BNP和β-MHC的mRNA转录水平进行检测。
(5)通过Westernblot检测各处理组细胞中ANP和β-MHC的蛋白表达水平、TRAF2和NF-κB通路的表达水平。
(6)用DCFH-DA法检测各处理组细胞活性氧(ROS)的水平。
结果:
(1)细胞活力:10、50和100μM野黄芩素分别处理H9c2和AC16细胞12小时、24小时和48小时后,各处理组细胞活力与对照组相比差异没有统计学意义。
(2)细胞表面积和心肌肥大标志物:50μMPE使H9c2和AC16细胞的表面积明显增加,同时心肌肥大标志物的mRNA转录水平和蛋白表达水平升高,经过10、50、100μM野黄芩素处理能够显著地降低细胞表面积,心肌肥大标志物的mRNA转录水平和蛋白表达水平。
(3)ROS水平的变化:与对照组相比,PE处理后H9c2和AC16细胞内ROS水平升高,10,50和100μM野黄芩素治疗24小时后,细胞内ROS水平明显降低。
(4)TRAF2和NF-κB信号通路中蛋白的变化:Westernblot结果显示:在H9c2和AC16细胞中,与对照组相比,PE引起TRAF2通路中TRAF2、P-TRAF2的表达和NF-κB通路中P50、P65和P-iκBα的表达水平明显升高,iκBα的表达水平降低,10,50和100μM野黄芩素治疗24h和48h后TRAF2、P-TRAF2、P50、P65和P-iκBα的表达降低,iκBα的表达升高。
结论:野黄芩素能够抑制PE诱导的H9c2和AC16心肌细胞肥大,其作用机制可能是调节细胞内ROS水平和抑制TRAF2/NF-κB通路。
目的:通过观察野黄芩素对PE诱导的H9c2和AC16心肌细胞表面积大小和心肌肥大标志物的影响,探讨野黄芩素是否可以保护PE诱导的心肌肥大,并初步研究作用的分子机制,为心肌肥大的预防和治疗提供参考。
方法:
(1)体外培养H9c2和AC16细胞,用不同浓度的野黄芩素处理后用CCK-8进行细胞活力检测。
(2)细胞分组及处理:体外培养细胞并分组:对照组、PE组(50μMPE)、PE+低剂量野黄芩素组(50μMPE+10μM野黄芩素)、PE+中剂量野黄芩素组(50μMPE+50μM野黄芩素)和PE+高剂量野黄芩素组(50μMPE+100μM野黄芩素)
(3)对H9c2和AC16细胞的骨架和核染色,在荧光显微镜下观察细胞并用ImageJ软件测量各处理组细胞表面积大小。
(4)通过RT-qPCR对各处理组细胞中ANP、BNP和β-MHC的mRNA转录水平进行检测。
(5)通过Westernblot检测各处理组细胞中ANP和β-MHC的蛋白表达水平、TRAF2和NF-κB通路的表达水平。
(6)用DCFH-DA法检测各处理组细胞活性氧(ROS)的水平。
结果:
(1)细胞活力:10、50和100μM野黄芩素分别处理H9c2和AC16细胞12小时、24小时和48小时后,各处理组细胞活力与对照组相比差异没有统计学意义。
(2)细胞表面积和心肌肥大标志物:50μMPE使H9c2和AC16细胞的表面积明显增加,同时心肌肥大标志物的mRNA转录水平和蛋白表达水平升高,经过10、50、100μM野黄芩素处理能够显著地降低细胞表面积,心肌肥大标志物的mRNA转录水平和蛋白表达水平。
(3)ROS水平的变化:与对照组相比,PE处理后H9c2和AC16细胞内ROS水平升高,10,50和100μM野黄芩素治疗24小时后,细胞内ROS水平明显降低。
(4)TRAF2和NF-κB信号通路中蛋白的变化:Westernblot结果显示:在H9c2和AC16细胞中,与对照组相比,PE引起TRAF2通路中TRAF2、P-TRAF2的表达和NF-κB通路中P50、P65和P-iκBα的表达水平明显升高,iκBα的表达水平降低,10,50和100μM野黄芩素治疗24h和48h后TRAF2、P-TRAF2、P50、P65和P-iκBα的表达降低,iκBα的表达升高。
结论:野黄芩素能够抑制PE诱导的H9c2和AC16心肌细胞肥大,其作用机制可能是调节细胞内ROS水平和抑制TRAF2/NF-κB通路。