【摘 要】
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目的:本研究旨在探索周期性机械应力,外源性BMP-2(Bone morphogenetic proteins-2,骨形态发生蛋白-2)与复合壳聚糖微球纤维蛋白凝胶支架在构建组织工程髓核中的应用,并进一步探究其作用机制。方法:体外培养髓核间充质干细胞,分别在周期性机械应力、外源性BMP-2单独或联合使用条件下,应用CCK-8、RT-PCR(Real-time quantitative polymer
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目的:本研究旨在探索周期性机械应力,外源性BMP-2(Bone morphogenetic proteins-2,骨形态发生蛋白-2)与复合壳聚糖微球纤维蛋白凝胶支架在构建组织工程髓核中的应用,并进一步探究其作用机制。方法:体外培养髓核间充质干细胞,分别在周期性机械应力、外源性BMP-2单独或联合使用条件下,应用CCK-8、RT-PCR(Real-time quantitative polymerase chain reaction,实时聚合酶链式反应)、WB(Western Blot,免疫蛋白印迹)检测细胞增殖和分化能力。探索外源性BMP-2促进髓核间充质干细胞增殖、分化的最适浓度,并观察其与周期性机械应力促进髓核间充质干细胞增值和分化是否具有协同作用。构建复合壳聚糖纤维蛋白凝胶支架,通过不同浓度的配比,探究最优复合支架的配比浓度。在复合支架上培养髓核间充质干细胞,构建组织工程髓核,应用扫描电镜及组织学染色评估周期性机械应力、外源性BMP-2单独或联合使用条件下组织工程髓核间的优劣。应用免疫荧光技术及RNA干扰技术探究周期性机械应力与内源性BMP-2间的相关性。最后,使用RNA干扰技术进一步研究周期性应力下BMP-2调控髓核间充质干细胞增殖及分化的机制。结果:单独或联合应用周期性机械应力及外源性BMP-2能够有效促进髓核间充质干细胞增殖、分化并表达细胞外基质,其中,两者共同作用时效果更为明显,与对照组、单独应用组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。外源性BMP-2的最佳作用浓度为200 ng/m L,在该浓度下,髓核间充质干细胞的增殖、分化及细胞外基质的表达能力较其余浓度明显增高,差异具有统计学意义(P<0.05)。在周期性机械应力的作用下,使用免疫荧光技术能观察到髓核间充质干细胞内源性BMP-2表达量明显增加,通过RNA干扰技术对内源性BMP-2进行抑制后,发现细胞外基质蛋白的表达明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。扫描电镜下观察发现,在不同配比的复合壳聚糖纤维蛋白凝胶支架上,细胞的黏附生长能力不同,当复合壳聚糖纤维蛋白凝胶支架浓度为50mg/m L时,髓核间充质干细胞的黏附生长能力最强。同时,在组织切片下观察到,单独使用BMP-2刺激组织工程髓核时,髓核间充质干细胞除了成软骨分化外还会有部分细胞进行成骨分化,但在周期性机械应力与外源性BMP-2的共同作用下,能够有效抑制髓核间充质干细胞的成骨分化,促使其成软骨分化并表达相应的细胞外基质。最后,在使用RNA干扰技术分别对ITG A1(integrinα1,整合素α1)和BMP-2进行抑制后,发现周期性机械应力通过ITG A1/BMP-2/Smad1/RUNX2轴来调控髓核间充质干细胞的增殖分化。结论:本研究证实了联合应用周期性机械应力和BMP-2,可以有效促进髓核间充质干细胞的增殖和成软骨分化,并以复合壳聚糖微球纤维蛋白凝胶支架为基础,构建了高质量的组织工程髓核。同时证明了ITG A1在周期性机械应力的作用下作为BMP-2/Smad1/RUNX2轴的上游对髓核间充质干细胞的增殖、分化及表达细胞外基质进行调节。本研究为椎间盘退变的治疗提供了一个新的选项。
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目的:分析评估三维可视化技术(three-dimensional visualization technology,3DVT)在肝门恶性狭窄患者可切除性及术后恢复中的应用价值。方法:选取2015年06月-2021年06月在泰州市人民医院肝胆外科收治的50例肝门恶性狭窄患者为研究对象,根据患者应用方法进行分组,术前使用3DVT纳入3DVT组,术前行传统影像学检查进行手术规划纳入2D组。入组人员均行腹
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