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甘遂 Kansui Radix 为大戟科(Euphorbiaceae)植物甘遂Euphorbia kansui T.N.Liouex T.P.Wang的干燥块根,味苦,性寒,是临床常用的有毒中药饮片之一,具有泻水逐饮、消肿散结之功效。中医临床上广泛用于治疗胸腹积水、水肿胀满、痰饮积聚、二便不利等症。但甘遂具有强烈的刺激性和毒性,仅限外用,内服必经炮制,以保证临床用药的安全性。论文研究内容主要从以下几方面展开:一、文献研究通过查阅相关古今文献,从常见的大戟属中含二萜类的中药和二萜类的主要结构分类对大戟属中二萜类研究进行了较为系统的综述,文献研究表明,大戟属植物多具有毒性,主要含二萜类、三萜类、甾醇类成分等,而二萜类成分普遍具有抗癌、抗菌、抗病毒等疗效,且大多二萜类含10-12元环,醇酯键或内酯键,甘遂和千金子中都含有巨大戟烷型二萜类成分,狼毒和京大戟二萜类成分多具有内酯键。因此对于该类化合物结构与毒性关系的深人探讨可为该类成分以及大戟属药用植物临床安全用药提供科学依据。二、通过对斑马鱼胚胎的毒性研究,确定毒性最大的成分群为成分群B采用斑马鱼胚胎对生、醋甘遂各成分群进行毒性评价,在生、醋甘遂各成分群中,成分群B的毒性最大,成分群C的毒性与成分群B相比较小,成分群A的毒性最小,成分群D在一定剂量范围内,未表现出毒性,而且生甘遂各成分群的毒性均明显大于醋品。提示我们甘遂经醋炙后能够降低甘遂的急性毒性,为甘遂醋炙减毒机理提供了重要依据。三、甘遂乙酸乙酯部位的化学成分研究本实验通过对各不同洗脱梯度洗脱的部分运用正-反相制备型高效液相色谱及制备薄层等分离方法,分离得到20个化合物,采用TLC、UV、NMR等鉴别手段,鉴定了其中15个化合物,巨大戟烷型二萜类5个,分别为[kansuiphorinC](KS-03),[3-O-(2’E,4’Z-decadienoyl)-20-O-acetylingenol](KS-04),[3-O-(2’E,4’E-decadienoyl)-20-O-acetylingenol](KS-05),[3-O-benzoyl-20-deoxyingenol](KS-06),[5-O-benzoyl-20-deoxyingenol](KS-07);假白榄烷型二萜类 3 个,分别为[kansuinin A](KS-10),[kansuinin D](KS-11),[kansuinin E](KS-12);三萜类化合物 5 个,分别为[euphol](KS-13),kansenone(KS-08),[epi-kansenone](KS-09),eupha-8,23-di-ene-3β,11β-diol-7-one(KS-01),tirucalla-8,23-diene-3β,11β-diol-7-one(KS-02)。其他类 2 个,分别为[β-sitosterol](KS-14),[isoscopletin](KS-15)。其中化合物(KS-01)为首次从甘遂中分离得到,化合物(KS-02),经文献检索,为一新化合物。增殖抑制实验结果表明,KS-01和KS-02对HCT-116细胞及MKN-45细胞,均具有较强的毒性,且呈一定的量-毒关系,推测化合物KS-01和KS-02可能为甘遂抗癌活性的物质基础。四、甘遂醋炙前后乙酸乙酯部位及不同成分群定量研究运用液-质联用技术对甘遂醋炙前后乙酸乙酯部位及不同成分群的含量进行测定,结果表明甘遂醋炙后,乙酸乙酯部位中,除5-O-benzoyl-20-deoxyingenol的含量升高约13.25%外,其余所含二萜类及三萜类成分含量均有所降低,其中巨大戟烷型二萜类成分降低率分别约为14.33%,12.78%,18.06%,7.55%;假白榄烷型二萜类成分降低率为19.41%,10.37%,16.13%,12.45%,11.43%;三萜类成分降低率为15.80%,14.51%。在成分群A中,除5-O-benzoyl-20-deoxy-ingenol的含量升高约21.97%外,其余均下降,巨大戟烷型二萜类成分降低率分别约为 14.18%,16.09%。在成分群 B 中,除 5-O-benzoyl-20-deoxyingenol 的含量升高约8.01%外,其余均下降,巨大戟烷型二萜类成分降低率分别约为9.22%,17.53%,20.48%,4.45%;三萜类降低率为8.67%,11.43%。在成分群C中,假白榄烷型二萜类成分降低率为12.76%,10.34%,9.08%,8.99%,22.19%。在成分群D中,基本不含有二萜类及三萜类成分。5-O-benzoyl-20-deoxyingenol因其与大戟萜酯C具有相同母核结构,推测在醋炙过程中大戟萜酯C可能水解,转化为5-O-benzoyl-20-deoxyingenol,从而使其含量升高。综合上述的成分变化及第二章研究结果,我们推测甘遂萜类成分的降低与其醋炙减毒具有较好的相关性。五、研究KS-04水解前后的结构与毒性,探讨甘遂醋炙后二萜类的可能变化甘遂历代均用醋炙以降低其毒性,故对KS-04采用酸水解,探讨醋炙后二萜类成分的可能变化。采用TLC和UPLC法对水解产物进行定性分析,运用Q-TOF对水解产物进行结构分析,然后以IEC-6细胞对KS-04及水解产物进行毒性评价。实验结果表明,该化合物经酸水解后,在薄层色谱中KS-04的下方有一个新物质产生,从UPLC色谱图可知,该新物质在醋甘遂乙酸乙酯浸膏中含量较高,而在相应的生品中含量较低。通过Q-TOF分析该成分可能为巨大戟二萜醇,其对IEC-6细胞的毒性明显小于KS-04。故推测甘遂中毒性较大的巨大戟烷型二萜类成分经醋炙后可能转化为毒性较小的醇,可能是甘遂醋炙减毒的作用机理。