猪囊尾蚴组织细胞的培养及其杂交瘤细胞株的初步建立与鉴定

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猪囊虫病(Cysticercosis cellulosae )是由猪带绦虫(Taenia solium)的幼虫猪囊尾蚴寄生于人或猪而引起的人畜共患寄生虫病。囊虫病和绦虫病在中国大部分地区尤其在少数民族地区是一个重要的公共卫生问题,对人的健康危害很大。不仅如此囊虫病的广泛存在还造成畜牧业的重大经济损失,极大影响了我国畜产品在国际市场上的竞争力,因而是公认的世界经济病之一。猪囊尾蚴病的免疫预防之所以一直困扰着兽医工作者,主要原因是抗原来源问题。猪囊尾蚴原代组织细胞体外培养的成功,为猪囊尾蚴细胞疫苗的研制提供了条件。但是,由于猪囊尾蚴原代细胞生长缓慢,满足不了利益要求。为了实现通过体外培养的途径快速生产猪囊尾蚴组织细胞抗原我们进行了本项探索。试验猪人工感染猪带绦虫虫卵三个月经ELISA检测血清为阳性者宰杀,收集新鲜的猪囊尾蚴,经处理获得猪囊尾蚴组织细胞,对猪囊尾蚴组织细胞进行体外培养,测定生化指标,观察显微结构。猪囊尾蚴原代细胞在体外成功传代20代以上,测得其染色体为28条14对,细胞生长周期14到21天,细胞系含皮层细胞、实质细胞、成石灰小体细胞、焰细胞和成肌细胞五种细胞,细胞形状多为椭圆形、圆盘形,部分为圆形、梨形、圆盘形带有肩胛。选择状态良好的猪囊尾蚴原代组织细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0细胞融合,经筛选克隆后用ELISA法和基因检测法确认所得细胞系为杂交瘤细胞。测定杂交瘤细胞的生长曲线并与猪囊尾蚴组织细胞做对比,结果证明杂交瘤细胞生长速度大于猪囊尾蚴组织细胞。杂交瘤细胞抗原作为检测抗原,ELISA法检测猪囊虫病猪阴阳性血清,其阳性血清的检测OD值大于阴性血清的2倍以上,证明杂交瘤细胞抗原中包含有猪囊尾蚴组织细胞抗原;用杂交瘤细胞抗原免疫小鼠,用猪囊尾蚴纯化全虫抗原检测免疫小鼠血清抗体,结果为阳性,进一步证实杂交瘤细胞中含有猪囊尾蚴组织细胞抗原。实验初步证明,我们所获得的杂交瘤细胞是猪囊尾蚴原代组织细胞和小鼠骨髓瘤细胞SP2/0的杂合体。
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