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研究背景：据世界卫生组织的研究显示，人类的生殖能力在近半个世纪的时间内呈持续下降趋势，特别是男性的生殖能力，据统计精子的数量和质量平均值从五十年前的每毫升一亿一千万到现在的二千六百万。在我国统计学分析发现不孕不育患者中有一半是男性因素造成的。单精子胞浆内注射技术(intracytoplasmic sperm injection，ICSI)的成功使男性少精子症、无精子症患者看到了希望，通过治疗能够成为生物学父亲。那么造成男性不育的原因如何，外周血的激素水平哪项更能够准确反应睾丸的生精功能，精子在形态学方面有何改变以及男性不育的遗传学问题等等已成为当今辅助生殖领域的热点问题。目的：1．研究严重少精子症患者外周血清相关激素：睾酮(testosterone，T)、游离睾酮(free testosterone，FT)、性激素结合球蛋白(Sex hormone-binding globulin，SHBG)、血清抑制素B(inhibin B，IHN-B)水平与睾丸生精功能间的关系。2．运用扫描电子显微镜(scanning electron microscope，SEM)观察测定严重少精子症患者精子表面结构特点，检测精子畸形指数(sperm deformity index，SDI)，与精子常规染色(Diff-Quik法)光学显微镜观察进行对比研究。3．进行精子DNA提取，Y染色体微缺失(Y cheomosome microdeletion analysis)研究，比较体细胞Y染色体微缺失与配子Y染色体微缺失发生率。方法：1．严格按照WHO标准筛选分组，严重少精子症患者为实验组(重复精子常规计算机分析检洲精子密度低于5×10~6／ml，经2次以上检查并离心沉淀未见精子者除外)。对照组为已生育男性。于晨起间隔2小时抽取外周血两次，离心分离血清，将两次血清混匀后取适量混合，运用ELSA法测定外周血T、FT、SHBG、IHN-B进行检测。2．采取精液后运用梯度离心分离精子，运用锡箔纸作为精子SEM载体，按SEM制样程序制样，观察精子表面超微形态特点及缺陷；运用Diff-Quik法涂片常规染色精子，在光镜下进行精子头部缺陷、颈部缺陷、尾部缺陷记数观察；比较两种精子形态学检测方法。3．提取精子DNA，运用聚合酶链反应(polymerase chainreaction，PCR)特异地扩增Y染色体上的目标区域，进行精子Y染色体微缺失检测和外周血Y染色体微缺失率检测。4．结果进行统计学分析。结果：1．严重少精子症患者外周血血清IHN-B较对照组明显降，差异有显著性。血清T、FT、SHBG与对照组相比差异无显著性。2．严重少精子症患者的精子存在超微形态异常，SEM观察发现严重少精子症患者SDI与对照组比较明显增高(1.64±0.55和0.86±0.23，P＜0.05)。3．严重少精子患者精子Y染色体微缺失检测发现存在无精子症因子(azoospermia factor，AZF)C区(AZFc)缺失，其发生率为15％，较外周血AZFc检测发生率6.7％明显增高，差异具有显著性差异。未发现AZFa、AZFb等其它缺失。结论：1．严重少精子症患者的血清抑制素B检测较T、FT、SHBG等检测指标能准确预测睾丸的生精功能。2．严重少精子症之精子存在表面超微结构异常，其SDI明显高于对照组，SEM观察精子较光学显微镜普通染色技术更能够发现精子的头颈部缺陷。3．严重少精子症忠者精子Y染色体微缺失检测发现AZFc缺失阳性率明显高于外周血检测结果。讨论：1．男性不育呈不断上升趋势，使得我们不得不正视这个问题，多年以来学术界一直寻求更好、更准确的研究指标来反应睾丸的生精功能，本研究选取了目前较为关注的几个指标进行检测比较，发现IHN-B水平的高低能够更为准确的反应精子的生成情况。2．在精子扫描电子显微镜标本制样观测，具有独特的优点，能够更为直观发现精子的缺陷。通过对于一些反复进行助孕治疗失败病例的诊治将有所帮助。3．精子DNA提取有无可比拟的先进性、精确性，研究结果发现严重少精子症患者的AZFc缺失率较外周血明显增加，使过去一部分难以解释的严重少精子症的原因得到解释。4．ICSI技术使男性不育症患者看到了希望，有可能得到生物学予代，其子代的遗传性状如何，是我们将来需要深入研究的问题。