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目的： 探讨环丙沙星单用或联用黄连素对多药耐药的肺炎克雷伯菌（ Klebsiella pneumoniae, KPn）生物膜形成的影响。 方法： 1.临床收集ESBLs（+）的多药耐药的KPn和对含环丙沙星在内的、3种或者3种以上不同类的抗菌药物敏感的KPn。测定各KPn株的最低抑菌浓度（Minimum Inhibitory Concentration,MIC），测定多药耐药KPn生物膜的最低抑菌浓度（The minimal inhibitory concentrations of the biofilm,MIC-b）。 2.应用结晶紫法测定多药耐药KPn的产膜能力和环丙沙星单用或联用黄连素对KPn生物膜形成的影响。 3.利用超声震荡平板稀释菌落计数法测定多药耐药KPn生物膜表面活菌菌落数和共聚焦显微镜（Confocal LaserScanning Microscopy,CLSM）测定平均荧光强度分析证实结晶紫法的实验结果，观察环丙沙星单用或联用黄连素对KPn生物膜形成的影响。 结果： 1.临床收集的7株多药耐药的KPn（R1-R7）和12株对抗生素敏感的KPn株（S1-S12）均对512μg/ml黄连素仍不敏感。单用环丙沙星R1-7的MIC为1~128μg/ml，S1-12的MIC为0.0019~0.03125μg/ml，环丙沙星和黄连素（256或512μg/ml）联用后，可使66.67％(8/12)对抗生素敏感的KPn株对环丙沙星的MIC下降1倍，100%（7/7）的多药耐药的KPn对环丙沙星的MIC下降1倍，但多药耐药株或抗生素敏感的KPn两者的下降率无统计学意义（P>0.05）。 2.7株ESBL（+）的多药耐药KPn中，强产膜株2株(28.57%)，中度产膜株4株(57.14%)，弱产膜株1株（14.29%），12株ESBL（-）的抗生素敏感的KPn中，强产膜株2株（16.67%），中度产膜株3株（25%），弱产膜株2株（16.67%），不产膜株5株（41.67%）。临床耐药菌株和敏感菌株之间，产膜株和不产膜株的比例上的差异无统计学意义（100% VS58.33%，P>0.05）。 3.多药耐药的 KPn的 MICCIP-b较浮游菌状态的肺炎克雷伯对环丙沙星的MICCIP增加2-8倍，环丙沙星联用黄连素（分别联用256、512μg/ml的黄连素）后，对肺炎克雷伯的MICCIP-b无影响。 4.环丙沙星单用或联用黄连素对多药耐药的 KPn生物膜的作用都以抑制为主。在相同的培养时间（相同的生物膜形成阶段），随着单用环丙沙星浓度的升高，对KPn生物膜的抑制作用越显著（P<0.05），但联合黄连素（256μg/ml或512μg/ml）后，与单用环丙沙星相比，对多药耐药的KPn生物膜抑制率的影响无差别（P>0.05）。 5.环丙沙星单用或联用黄连素对非成熟阶段的 KPn生物膜（培养4h、10h）生长的抑制作用比抑制成熟的Kpn的生物膜（培养时间18 h）的作用显著（P<0.05）；对非成熟阶段的KPn生物膜生物膜表面活菌的抑制作用（活菌比例0.43%）较成熟的Kpn的生物膜（活菌比例3.87%）的作用显著(P<0.05)。 6.环丙沙星组CLSM的平均荧光量（30.697Am x cm2）、环丙沙星联合黄连素组的平均荧光量（21.300Am x cm2）均较阳性对照组（不含药物组）的荧光强度（60.869Am x cm2）低（30.697Am x cm2VS60.869Am x cm2，P<0.05;21.300Am x cm2VS60.869Am x cm2,P<0.01）;但环丙沙星单用或联用黄连素组间的平均荧光量之间无显著差异（30.697Am x cm2VS21.300Am x cm2，P>0.05）。 结论： 单用环丙沙星或联用黄连素均明显抑制KPn，降低耐药或敏感KPn对环丙沙星的 MIC，主要抑制游离状态 KPn；单用环丙沙星或联用黄连素都对 KPn生物膜有抑制作用，抑制效果与药物的浓度和膜的成熟程度有关，但单用环丙沙星或联用黄连素对KPn生物膜的抑制作用无显著差别。