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目的:根据WHO统计，肺癌的发病率和死亡率居全球恶性肿瘤之首。在我国，肺癌的年发病率为35/10万人，其中80%-90%的患者为非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)。早期肺癌往往缺乏明显症状，临床确诊时多已发展到晚期。因此，对肺癌转移的分子机制及其抑制转移药物的研究有助于肺癌的早期诊断。肿瘤的侵袭与转移是多基因调控的复杂过程，这些基因之间的相互作用已成为国内外研究的热点。环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)是多种恶性肿瘤发生、发展的关键酶，在肺癌中呈过度表达，尤其在腺癌中表达明显上调。COX-2不仅促进肿瘤细胞增生、肿瘤新生血管生成，并能抑制肿瘤细胞凋亡、抑制机体免疫功能，也可促进肿瘤的侵袭和转移。基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)是基质金属蛋白酶家族中分布最广的，能降解细胞外基质(extracellular matrix,ECM)和基底膜，使原本均匀稳定的基底膜和细胞外基质结构被破坏，为癌细胞穿出原发灶、侵入微血管和淋巴管、再突入靶器官形成转移灶开辟了道路。CD44是人类分布极为广泛的细胞表面跨膜糖蛋白,其产物主要有两类,即标准型CD44s(standard form)和变异型CD44v(variant isoforms)。其中CD44v在肿瘤的发生和转移过程中起重要作用。CD44v6是CD44v的一种拼接变异体，其表达能改变肿瘤细胞表面黏附分子的构成与功能，从而有助于肿瘤细胞获得转移潜能。生存素(Survivin)是凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis proteins, IAP)基因家族的重要成员，是作用最强的凋亡抑制因子。Survivin具有抑制细胞凋亡、参与细胞周期调控作用，且与肿瘤细胞的分化增殖、血管形成及浸润转移密切相关。恶性肿瘤的特征是无限增殖。增殖细胞核蛋白（Ki67）是近年来研究较多的反映肿瘤增殖活性的蛋白。Ki67的表达能可靠而迅速地反映恶性肿瘤增殖率，与肿瘤的增殖、浸润、转移潜能和预后密切相关。吲哚美辛(Indomethacin,IN)作为非甾体抗炎药(NSAIDs)，具有消炎、解热镇痛等作用。其对肺癌移植瘤的抑制作用及其机制国内外报道较少，联用应用COX-2抑制剂是否可增强化疗药物的细胞毒性作用尚不明确。本研究旨在探讨吲哚美辛对人肺癌裸鼠移植瘤治疗作用及其机制的研究和Survivin、MMP-2、CD44v6和Ki67表达的影响，以探讨肺癌浸润转移的分子机制。方法:1.将人肺癌A549细胞接种于裸鼠皮下建立移植瘤模型，随机分为四组：对照组、吲哚美辛组、奥沙利铂组、吲哚美辛和奥沙利铂联合用药组。给药42天后，处死裸鼠，取出移植瘤组织，免疫组织化学检测MMP-2、CD44v6和Survivin的表达，荧光实时定量PCR法检测肿瘤组织MMP-2、CD44v6和Survivin mRNA的表达。2.将人肺癌A549细胞接种于裸鼠皮下建立移植瘤模型，随机分为四组：对照组、吲哚美辛一组（1mg/kg/d），吲哚美辛二组（2.5mg/kg/d），吲哚美辛三组（4mg/kg/d）。给药42天后处死裸鼠，取出移植瘤组织，免疫组织化学检测Survivin和Ki67表达，荧光实时定量PCR法检测肿瘤组织Survivin和Ki67mRNA的表达。结果:1吲哚美辛联合奥沙利铂对人肺癌裸鼠移植瘤治疗作用的研究1.1将肿瘤细胞种植于25只裸鼠，成瘤率100%。种植后第10天，肿瘤直径平均4mm。1.2以图像分析系统对MMP-2、CD44v6和Survivin蛋白免疫组织化学染色切片进行积分光密度测定，方差分析结果表明，与对照组相比，吲哚美辛组、奥沙利铂组及联合组MMP-2、CD44v6和Survivin蛋白表达水平均降低(分别P<0.05)；联合组MMP-2、CD44v6和Survivin蛋白表达水平低于吲哚美辛组和奥沙利铂组(分别P<0.05)；吲哚美辛组与奥沙利铂组相比， MMP-2、CD44v6和Survivin蛋白表达水平无差别(P﹥0.05)。1.3实时荧光定量PCR法测定MMP-2、CD44v6和Survivin mRNA表达，方差分析结果显示，与对照组相比，吲哚美辛组、奥沙利铂组及联合组MMP-2、CD44v6和Survivin mRNA表达水平均降低(分别P<0.05)；联合组表达MMP-2、CD44v6和Survivin mRNA表达水平低于吲哚美辛组和奥沙利铂组(分别P<0.05)；吲哚美辛组与奥沙利铂组相比， MMP-2、CD44v6和Survivin mRNA表达水平无差别(P﹥0.05)。2不同剂量吲哚美辛对人肺癌裸鼠移植瘤的治疗作用及其抗增殖与凋亡的作用研究2.126只裸鼠成瘤，成瘤率100%，肿瘤细胞种植后第10天，肿瘤直径平均达4mm。2.2以图像分析系统对Survivin和Ki67蛋白免疫组织化学染色切片进行积分光密度测定，方差分析结果显示，与对照组相比，吲哚美辛各组Survivin和Ki67蛋白表达水平均明显降低，（分别P<0.05）；与吲哚美辛低剂量组相比，中剂量组和高剂量组Survivin和Ki67蛋白表达水平降低（P<0.05）；中剂量组和高剂量组相比，Survivin和Ki67蛋白表达水平无明显差异（P﹥0.05）。2.3实时荧光定量PCR法测定Survivin和Ki67mRNA表达，方差分析结果显示，与对照组相比，吲哚美辛各组Survivin和Ki67mRNA表达水平均降低（分别P<0.05）；中剂量组与高剂量组相比，Survivin和Ki67mRNA表达水平无统计学差异（P﹥0.05）。结论:1吲哚美辛单药或联合奥沙利铂均能明显抑制人肺癌裸鼠移植瘤MMP-2、CD44v6和Survivin蛋白及MMP-2、CD44v6和Survivin mRNA的表达。两药联合应用提高了抗肿瘤及抗淋巴转移疗效。2不同剂量吲哚美辛均能抑制人肺癌裸鼠移植瘤中Survivin和Ki67表达，具有抗肿瘤细胞增殖和促进肿瘤细胞凋亡的双重作用。Survivin和Ki67的表达具有显著相关性，二者在肺癌的发生发生发展中有协同作用，联合检测对预测肿瘤预后具有重要作用。同时，诱导细胞凋亡作为一种新的肿瘤治疗途径，为肺癌治疗提出了一个新的方向。