论文部分内容阅读
目的：大鼠海马属于脑的边缘系统,包括CA1、CA2和CA3。在结构上无明显分界标志,功能上可视为一个整体。5-羟色胺(5-HT),一种在中枢神经系统广泛分布的神经递质,主要参与情感、睡眠、疼痛、学习记忆等复杂生理功能的调节。为了解5-羟色胺在海马中的分布特点,本实验采用5-HT特异性抗体的方法,利用免疫组织化学技术,观察海马CA1、CA2和CA3中三个区域5-HT神经元及神经纤维终末的表达,为进一步研究5-HT在海马学习、记忆的作用机制,提供形态学依据。方法：1、实验动物和主要试剂：成年雄性SD大鼠8只(由大连医科大学实验动物中心提供)、山羊超敏二步法免疫组化检测试剂、浓缩型DAB(购自北京中杉金桥)。2、灌注固定：把大鼠经10%水合氯醛进行腹腔麻醉。仰卧固定,用剪刀打开胸腔,将穿刺针经左心室插入升主动脉,剪开右心耳,先用150ml生理盐水快速冲洗后,给予4%多聚甲醛磷酸缓冲液300ml灌注,持续灌注4小时后断头开颅取脑,放入相同固定液中4℃过夜。在振动切片机连续冠状切片,片厚30um,选取具有海马的切片,置入0.01mol/L的PBS(PH值7.4)溶液中备用。3、免疫组织化学法：采用二步法进行免疫组织化学染色。4、统计学分析：在正置荧光显微镜图像分析仪观察拍摄,核团定位参照George Raxinos,Charles Watsonbian编著的The Rat Brain in stereotaxic coordinates(大鼠脑立体定位图谱,第三版)。在低倍镜下观察海马和5-HT阳性神经元在海马中CA1、CA2和CA3区的表达。在高倍镜下观察5-HT阳性神经纤维终末。所得数据采用SPSS16.5软件分析。结果：在低倍光镜下观察：1、大鼠海马内5-HT免疫反应产物为棕黄色(图1 a),可见大量的5-HT能阳性神经元和树突。阳性产物位于胞浆中,细胞核透明,未见明显染色(图2a,3a,4a)2、免疫反应阳性产物在海马锥体层细胞中分布最多,密集呈带。3、在20×10倍光镜下计数,CA2区免疫反应阳性神经元数最多,其次是CA1区,CA3区最少。4、CA3的细胞比其它区域略小,染色比CA1区弱。在高倍镜下：1、在海马CA1、CA2和CA3中呈阳性反应的神经元胞体为圆形或卵圆形。2、海马内可见免疫反应阳性、呈串珠状的5-HT能神经纤维终末(图2b,3b,4b)。免疫反应对照切片为阴性(4×10),未见CA1、CA2和CA3区有5.HT免疫反应阳性神经元及神经纤维终末表达。统计学结果：CA1、CA2和CA3区阳性神经元平均数士标准差分别是5.60±1.075,5.70±1.252,3.50±1.269。经统计学分析CA1、CA2与CA3区阳性神经元数之间比较有统计学差异,CA1>CA3, CA2>CA3 (P<0.01)。结论：1、大鼠海马内有5-HT能神经元和神经纤维终末表达。2、5-HT免疫阳性产物在CA1、CA2与CA3区表达强度有差异,其阳性神经元数CA1>CA3, CA2>CA3。