研究背景及目的顺铂(Cisplatin, CP)是一种有效的化疗药物,被广泛应用于多种实体肿瘤的治疗,如卵巢癌、睾丸癌、子宫颈癌、肺癌以及头颈部的鳞状细胞癌等。临床上,CP的大剂量应用产生的副作用主要包括骨髓抑制、神经毒性、耳毒性以及肾毒性等,其中肾毒性严重限制其临床应用。CP可引起肾小管功能紊乱并导致急性肾功能衰竭,发生率约为20-30%。CP引起肾小管上皮细胞损伤的机制主要包括氧化应激、炎症、细胞坏死或凋亡以及肾脏血供减少所引起的氧供不足,其中肾小管上皮细胞的凋亡在CP肾毒性发生机制中扮演重要的角色。肾小管上皮细胞凋亡途径包括：死亡受体介导的外源性凋亡途径、内质网应激凋亡途径、线粒体凋亡途径。近年来,内质网(endoplasmic reticulum, ER)应激介导的凋亡途径越来越受到大家的关注。表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate, EGCG)是从绿茶中提取的茶多酚,是绿茶的主要活性成分,具有抗凋亡、抗氧化、抗炎等特性,可用于多种疾病的预防,但EGCG对CP肾毒性的保护作用和机制仍未完全明确。本实验采用EGCG干预CP所引起的小鼠急性肾损害模型,通过比较干预药物使用前后肾功能生化指标、肾小管上皮细胞病理形态改变及肾小管上皮细胞的凋亡情况,同时检测内质网应激凋亡通路中的标志蛋白分子半胱氨酸天冬氨酸酶12 (Cysteine aspartase-specific proteases 12, caspase-12)、葡萄糖调节蛋白78 (glucose regulating protein78, GRP78)的表达情况,旨在研究EGCG能否减轻CP肾毒性以及探索EGCG肾脏保护的作用机制。研究方法将28只雄性C57/BL6小鼠随机分为四组：(1)对照组(N,n=7)：给予该组小鼠一次性腹腔注射生理盐水,注射量为10ml/kg; (2) EGCG组(E,n=7)：给予该组小鼠一次性腹腔注射EGCG,注射量为100mg/kg (EGCG溶解于生理盐水,稀释浓度为10mg/ml); (3) CP急性肾损伤组(C,n=7)：给予该组小鼠一次性腹腔注射CP,注射量为20mg/kg(CP溶于生理盐水,稀释浓度为2mg/ml); (4) CP+EGCG干预组(C+E,n=7)：该组小鼠在接受腹腔注射CP 20mg/kg前30分钟行腹腔注射EGCG 100mg/kg预处理,48小时后再次给予腹腔注射EGCG 100mg/kg。在首次注射药物5天后将小鼠处死、称重并留取肾组织及血清,测量小鼠肾功能指标血清肌酐(serum creatinine, Scr)、尿素氮(blood urea nitrogen, BUN),计算小鼠肾脏系数(renal index, RI),行PAS染色观察肾小管上皮细胞病理形态学改变,TUNEL凋亡实验检测肾小管上皮细胞凋亡情况,免疫组化、蛋白质印迹法检测内质网应激凋亡途径中标志性蛋白(GRP78,caspase-12)的表达情况。结果1.小鼠肾功能及肾脏系数改变：与对照组相比,CP急性肾损伤组Scr、BUN、RI显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与CP急性肾损伤组比较,CP+EGCG干预组小鼠Scr、BUN、RI显著降低(P<0.05)。(表一)2.小鼠肾组织病理改变：对照组和EGCG组肾小管结构正常,CP急性肾损伤组肾小管上皮细胞空泡样变、肿胀、细胞坏死、肾小管内可见大量管型。与CP急性肾损伤组相比,CP+EGCG干预组肾组织病理损伤明显减轻(P<0.05)。(图一)3.小鼠肾小管上皮细胞凋亡情况：CP急性肾损伤组的肾小管上皮细胞凋亡数目较对照组明显增加(P<0.05),而CP+EGCG干预组肾小管上皮细胞凋亡数目较CP急性肾损伤组明显减少(P<0.05),对照组和EGCG组仅有散在少量细胞凋亡。(图二)4.小鼠肾组织内内质网凋亡途径标志蛋白的表达：与对照组相比,CP急性肾损伤组GRP78、caspase-12蛋白表达水平上调(P<0.05)。CP+EGCG干预组小鼠组织内GRP78、caspase-12蛋白表达量较CP急性肾损伤组减少(P<0.05)。(图三、图四)结论EGCG可通过抑制内质网应激介导的凋亡途径减轻CP肾毒性。