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目的:1、检测趋化因子CCR7在多种乳腺癌细胞系中的表达情况;2、构建CCR7-shRNA表达载体及对高表达CCR7的乳腺癌细胞的沉默效应。3、检测CCR7对乳腺癌细胞迁移能力的影响。方法:1、收集MDA-MB-231、4T1、MCF10A、HCC1937、MDA-MB-361、 HCC1580、HCC1806、184A1、184B5、MCF10A、MDA-MB-468、MCF-7多种乳腺癌细胞,经Western blotting检测上述多种乳腺癌细胞CCR7蛋白的表达水平。2、设计并构建靶向CCR7基因短发夹RNA真核表达质粒,经BamHI酶/EcoRI酶双酶切鉴定CCR7-shRNA表达载体构建成功后,感染经Western blotting检测显示高表达CCR7的乳腺癌细胞,分别命名为A#、B#、C#、G#、H#,然后通过嘌呤霉素筛选稳定表达CCR7-shRNA的乳腺癌细胞株。最后通过Western blotting检测干扰效果,进一步优化转染条件,以实现最佳干扰效果;最终选取干扰效果最佳的1条shRNA真核表达质粒转染的乳腺癌细胞,即得到稳定表达CCR7-shRNA的乳腺癌细胞株。3、通过细胞划痕实验来检测稳定沉默CCR7乳腺癌细胞株迁移能力的变化情况。结果:1、Western blotting检测结果显示:CCR7蛋白水平在6株乳腺癌细胞中均有表达,其中在MDA-MB-231细胞、4T1细胞中表达量最强,T47D细胞、MDA-MB-468细胞、HCC1937细胞次之,MCF-7细胞表达量最弱。HCC1580、HCC1806、184A1、184B5、MCF10A、MDA-MB-361均未见明显表达。最后我们选取MDA-MB-231乳腺癌细胞进行后续的实验。2、经酶切鉴定证明设计并构建的靶向CCR7基因短发夹RNA真核表达质粒已经成功,然后感染MDA-MB-231乳腺癌细胞,最终通过Western blotting检测对MDA-MB-231乳腺癌细胞的沉默效应,结果示CCR7-shRNA G#能非常有效地抑制MDA-MB-231细胞中内源性CCR7的蛋白水平的表达。3、经细胞划痕实验结果显示:对照组ShLacz MDA-MB-231细胞划痕的愈合程度达到70%,而在实验组的CCR7-shRNA G#细胞愈合程度为46%。结论:1、趋化因子受体CCR7在多种乳腺癌细胞株中存在高表达的情况,特别是MDA-MB-231细胞,提示CCR7高表达水平与乳腺癌转移的发生可能有一定相关性,乳腺癌细胞株MDA-MB-231可作为CCR7后续相关实验的研究对象。2、靶向CCR7基因shRNA表达载体构建无误,感染MDA-MB-231并获得稳定表达CCR7-shRNA的细胞株,为进一步探讨趋化因子受体CCR7在乳腺癌发生、发展过程中相关性奠定了初步基础。3、下调CCR7表达后抑制了乳腺癌细胞MDA-MB-231的迁移能力。