抗植物病原菌物蛋白的分离纯化及其主要性质研究

来源 :福建农林大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:wkadjx
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植物病原菌物引起的病害对农业生产造成极大的损失,而普遍使用的化学农药具高毒性、污染环境、易产生耐药性等众多缺点。相比较而言,抗菌蛋白具有多种优势,尤其是安全性、环境兼容性、高效性、不易产生耐药性等方面。本研究先后从七里黄种子和中药金蝉花中纯化出了两个抗菌蛋白,并对二者主要性质以及抗菌机制进行了初步的探究。本研究采取的分离纯化策略主要包含了 SP-Sepharose阳离子交换层析、AKTA pure Mono S强阳离子交换层析和AKTA pure Superdex 75凝胶层析三个主要步骤,依此方法分别从七里黄(Cheiranthus allionii)种子和金蝉花(Ophiocordycepssobolifera)中纯化出抗菌物蛋白,前者分子量约7 kDa,后者分子量约17 kDa。七里黄抗菌蛋白与金蝉花抗菌蛋白都表现出强烈的植物病原菌物抗性,其中,七里黄抗菌蛋白对苹果黑腐皮壳菌(Valsa maali)、凸脐蠕孢菌(Exserohilum monoceras)、玉米小斑病菌(Helminthosporium maydis)、落花生球腔菌(Mycosphaerella arachidicola)、芭乐炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides)、灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)、禾谷镰刀菌(Fusarium graminearuw)、稻瘟菌(Magnaporthe oryzae)、尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)、茄病镰刀菌(Fusarium solanif sp.glycines)、烟草炭疽病菌(Colletotrichum micotianae)小白菜炭疽病菌(Colletotrichum higginsianum)、马铃薯晚疫病菌(Phytophthora infestans)、烟草 白绢(Sclerotium rolfsii)等14种植物病原菌物都有抑制活性,其中,对尖孢镰刀菌、落花生球腔菌、凸脐蠕孢菌、苹果黑腐皮壳菌的半抑制浓度分别为:3:15 μg/mL、5.19μg/mL、7.05μg/mL、7.22μg/mL;除铃薯晚疫病菌外,金蝉花抗菌蛋白对上述菌物均有抑制活性,其中,对烟草炭疽病菌、落花生球腔菌、尖孢镰刀菌、玉米小斑病菌的半抑制浓度分别为:5.39 μg/mL、9.25 μg/mL、9.25 μg/mL、14.79μg/mL。通过对七里黄抗菌蛋白和金蝉花抗菌蛋白进行质谱鉴定与数据库检索,结果表明,七里黄抗菌蛋白很可能是新发现蛋白,而金蝉花抗菌蛋白则是生物多聚转运蛋白ExbB(慢生根瘤菌)。在抑菌机理初步探究中,两个抗菌蛋白都能够诱导菌丝尖端积累几丁质,并表现出破坏菌物菌丝细胞膜完整性的效果。总而言之,七里黄抗菌蛋白与金蝉花抗菌蛋白同中有异,对植物病原菌物都具有广谱强效的抗性。本研究结果为开发新型生物农药提供了先导信息,为抗菌蛋白在植物菌物病害的防治方面的应用化奠定了基础。
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