瑞士乳杆菌蛋白酶固定化及连续制备ACE抑制肽的研究

来源 :南京师范大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:chendan790914
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瑞士乳杆菌蛋白酶能分解乳清蛋白产生ACE(血管紧张素转化酶)抑制肽,这些多肽的氨基酸序列和肽链长度各不相同,但都具有类似的降血压功能。为了实现ACE抑制肽的大规模生产及工业应用,本文就瑞士乳杆菌蛋白酶的固定化以及能连续生产ACE抑制肽的酶反应器进行了研究。采用常用的固定方法凝胶包埋法,对比海藻酸钠、明胶、卡拉胶、壳聚糖作为固定瑞士乳杆菌蛋白酶载体的优缺点,以操作的难易、耗时和成本为评价指标,最终确定海藻酸钠作为固定瑞士乳杆菌蛋白酶的最佳载体。在单因素实验基础上,研究凝结液氯化钙浓度、戊二醛质量浓度、海藻酸钠质量浓度、酶浓度对瑞士乳杆菌蛋白酶固定化的影响。运用响应面对固定化条件进行优化,确定瑞士乳杆菌蛋白酶的最优固定条件:凝结液氯化钙浓度0.1mol/L、戊二醛质量浓度0.39g/100mL、海藻酸钠质量浓度2.03g/100mL酶液、酶浓度7.55mg/mL,此时固定化酶平均酶活力为3.93U/mg。采用单因素研究和响应面设计结合确定了固定化的瑞士乳杆菌蛋白酶水解乳清蛋白产生ACE抑制肽的最优条件:即[S]/[E](w/w,%)为15,水解pH为7.5,水解温度为37℃,在此条件下酶解乳清蛋白,最后水解产物的ACE抑制率为59.47%,水解度为6.08%。以海藻酸钠固定化瑞士乳杆菌菌体、海藻酸钠固定化瑞士乳杆菌蛋白酶为研究对象,通过感官评价、活性评价、工艺性能评价,确定了固定化瑞士乳杆菌蛋白酶为酶反应器载体。设计了两种酶反应器:酶解-超滤偶联反应器和固定床反应器。选取合适的超滤膜,改变超滤压力和补料速度,实验确定了酶解-超滤偶联反应器生产ACE抑制肽最佳工艺条件:截留分子量为6000Da的中空纤维超滤膜、超滤压力为0.05MPa、补料速度为200mL/h的1.25%乳清粉。以1.2cm×80cm的填充柱作为固定床,研究流速对水解液中蛋白含量和ACE抑制率的影响,并确定了3.2mL/h为固定床反应器的最佳流速。对比两种反应器生产ACE抑制肽的效率,实验确定了酶解-超滤偶联反应器为适宜反应器,可以实现ACE抑制肽的连续制备。
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