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目的:肺癌是癌症相关死亡的主要原因，而其中非小细胞肺癌又占据了大多数。大约有10％～30％肿瘤患者有表皮生长因子受体突变，而临床上都用EGFR抑制剂治疗这种EGFR突变的肿瘤。虽然这种靶向对于EGFR突变的病人很有效，但是最终都会产生获得性耐药。而更重要的是由于在EGFR-TKI耐药过程中，触发了其他促增殖的受体酪氨酸激酶信号通路的激活，如FGFR和ALK通路等，因而即使EGFR被抑制，肿瘤细胞的增殖调控信号已经转向了其他通路。目前已有研究揭示FGF/FGFR的自分泌环的活化是促进阿法替尼耐药细胞存活和生长的补偿机制之一。因此，FGFR和EGFR双重抑制剂的研发特别是针对非小细胞肺癌及其耐药治疗具有重要的研究意义和前景。在本研究中，我们评价了自己合成的化合物D3这个EGFR/FGFR双靶点抑制剂的体内外抗肿瘤效果，同时探讨了D3通过抑制肿瘤细胞的EGFR以及下游信号通路同时也抑制FGFR旁路系统，从而抑制肿瘤的进一步发展和逆转耐药的机制。 方法: 1.激酶层面，利用ELISA方法初步评价我们合成的化合物对EGFR激活突变的活性，接着，对FGFR家族激酶和其他激酶进行进一步的的实验观察其是否具特异性。 2.在细胞层面，利用Western Blot法来观察化合物D3在细胞中对EGFR和FGFR及其下游信号传导途径的抑制活性;在化合物作用2小时后我们撤掉并给予新鲜的培养基以去除培养基中的化合物，此时记为0小时，收集撤药0小时，4小时，8小时和12小时后的蛋白进行不可逆验证;利用MTS法测定化合物对多种NSCLC细胞系作用72小时后的抗增殖作用及对正常细胞的毒性;利用流式细胞术、TUNEL、Caspase3来观察化合物对H1975细胞系作用24小时后对细胞凋亡的诱导作用。 3.在动物层面，将裸鼠接种H1975肿瘤细胞，在肿瘤达到一定体积时将动物分为5组，分别是溶剂组、D3组、WZ4002组、AZD4547组以及WZ4002和AZD4547联合给药组，并定期记录老鼠体重和肿瘤体积。对肿瘤组织进行Western Blot分析。 结果: 1.体外的实验表明D3无论是在激酶层面还是细胞层面，化合物D3不仅具有对突变的EGFR激酶有抑制活性作用，对FGFR1激酶也有很强的抑制活性作用。而且D3能抑制EGFR和FGFR以及下游信号通路的磷酸化。在NCI-H1975细胞株上化合物D3可以同时抑制肿瘤细胞的EGFR和它下游信号通路的磷酸化和FGFR旁路系统，从而达到抑制肿瘤的进一步发展和逆转耐药的效果。 2.体内的数据证明化合物D3对含有EGFR L858R/T790M突变以及FGFR高表达的NCI-H1975异种移植模型的抗肿瘤作用。尤其需要强调的是，在H1975异种移植模型中，与造模组相比，化合物D3在为10mg/kg剂量下引起肿瘤消退的能力优于同等剂量单独给予AZD4547和WZ4002阳性药组，与AZD4547和WZ4002联合给药组没有显著性差异，且没有产生明显的体重变化。随后的肿瘤组织的Western Blot分析结果与肿瘤体积的结果趋势一致。 结论:D3是新型双靶点酪氨酸激酶抑制剂，能靶向EGFR和FGFR来克服获得性耐药，从而发挥显著的抗肿瘤效果。