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目的:1.观察豚鼠膀胱cajal样细胞形态学特点并结合该细胞具有的特殊功能,探讨cajal样细胞在膀胱组织中的类型。
2.研究豚鼠糖尿病性膀胱病(DCP)逼尿肌中cajal样细胞的形态、分布及数量变化,探讨DCP逼尿肌功能障碍是否与cajal样细胞异常相关。
3.检测豚鼠DCP逼尿肌中c-kit mRNA、c-kit蛋白的表达水平,探讨c-kit基因表达与DCP中cajal样细胞异常关系及其发生机制。
方法:1.65只豚鼠随机分成对照组20只,实验组45只,实验组采用链脲佐菌素单次腹腔注射建立糖尿病豚鼠模型,饲养10周后运用尿动力学检测将实验组筛选出DCP组和糖尿病性非膀胱病(NDCP)组。
2.豚鼠膀胱制成冰冻切片,特异性免疫荧光染色标记膀胱cajal样细胞,在激光共聚焦显微镜(LCSM)观察膀胱组织中cajal样细胞的形态类型、分布及数量。
3.体外培养膀胱cajal样细胞,应用Fluo-4AM标记细胞内钙离子浓度含量,采用LCSM观察记录其钙离子振荡功能。
4.采用RT-PCR及LCSM检测技术分别检测各组膀胱组织c-kitmRNA及c-kit蛋白的表达。
结果:1.单体cajal样细胞分布在粘膜下层及肌层,二聚体cajal样细胞分布在肌层,肌层中二聚体cajal样细胞分布密度少于单体cajal样细胞(P<0.05)。
2.二聚体cajal样细胞组钙离子振荡频率及振幅明显高于单体cajal样细胞组频率(P<0.01)及振幅(P<0.05);二聚体cajal样细胞2-APB抑制组频率及振幅明显低于二聚体cajal样细胞组频率(P<0.01)及振幅(P<0.01),单体cajal样细胞2-APB抑制组频率及振幅与单体cajal样细胞组相应参数比较无显著统计学差异(P>0.05)。
3.DCP组两类cajal样细胞突起变短、变钝及两类cajal样细胞网络样连结破坏,并伴有两类cajal样细胞数量明显减少,DCP组单体cajal样细胞及二聚体cajal样细胞平均阳性面积百分比较正常对照组单体cajal样细胞(p<0.05)及二聚体cajal样细胞(p<0.01)显著降低。
4.RT-PCR结果显示,DCP逼尿肌中c-kitmRNA表达较对照组(p<0.01)及NDCP组(p<0.05)显著降低,NDCP组膀逼尿肌中c-kitmRNA表达与对照组比较无显著统计学差异(p>0.05)。
5.LCSM半定量分析结果显示,DCP组c-kit蛋白表达明显低于对照组(p<0.01)与NDCP组(p<0.01),NDCP组膀逼尿肌中c-kit蛋白表达与对照组比较无显著统计学差异(p>0.05)。
结论:1.正常豚鼠膀胱组织中存在有单体及二聚体两种不同形态类型cajal样细胞样细胞。
2.两类cajal样细胞数量减少和形态异常在DCP发病机制中可能扮演了重要角色。
3.DCP豚鼠膀胱中cajal样细胞异常与逼尿肌中c-kitmRNA、c-kit蛋白表达减少有关,因此基因表达异常可能是DCP的发病机制之一。