【摘 要】
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目的:探讨大鼠肺匀浆上清液诱导骨髓间充质干细胞向肺泡上皮细胞分化的可行性。方法:利用全骨髓贴壁分离法分离、纯化大鼠的间充质干细胞,观察细胞的形态,绘制生长曲线,并采用
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目的:探讨大鼠肺匀浆上清液诱导骨髓间充质干细胞向肺泡上皮细胞分化的可行性。方法:利用全骨髓贴壁分离法分离、纯化大鼠的间充质干细胞,观察细胞的形态,绘制生长曲线,并采用流式细胞术检测细胞表面抗原CD29、CD90、CD45、CD34、CD49d的表达情况。经骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞诱导液诱导后,分别采用茜素红染色法、油红O染色法、甲苯胺蓝染色法检测骨髓间充质干细胞的诱导分化情况。正常肺组织和博来霉素诱导的损伤肺组织,分别提取匀浆上清液,诱导第3代骨髓间充质干细胞。实验组分为三组:骨髓间充质干细胞组,骨髓间充质干细胞+正常大鼠肺匀浆上清液组,骨髓间充质干细胞+博来霉素损伤大鼠肺匀浆上清液组,持续诱导10天,通过细胞免疫荧光法和RT-PCR法分别在蛋白水平和基因水平检测SP-C的表达。结果:骨髓间充质干细胞培养到第3代时形成漩涡状、纺锤形、形态相对均一的贴壁细胞。流式细胞术检测结果显示其表面抗原CD29、CD90呈阳性,CD49d、CD34、CD45呈阴性。骨髓间充质干细胞经骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞诱导液诱导后,茜素红染色呈红色,油红O染色呈橘红色,甲苯胺蓝呈蓝色。经肺匀浆上清液诱导后的骨髓间充质干细胞,细胞免疫荧光和RT-PCR显示各干预组均有SP-C蛋白的表达,对照组无SP-C蛋白的表达。统计学分析结果:正常及博来霉素损伤大鼠肺匀浆上清液诱导细胞免疫荧光SP-C蛋白的表达阳性率分别为13.29%及25.27%;RT-PCR检测显示博来霉素损伤的肺匀浆上清液阳性率较正常肺匀浆上清液高。结论:全骨髓贴壁分离法可以有效获得数量充足、生长状态良好并具有分化潜能的间充质干细胞。大鼠正常肺匀浆上清液和博来霉素损伤的肺匀浆上清液均可以诱导骨髓间充质干细胞向肺泡上皮细胞分化,博来霉素损伤的肺匀浆上清液比正常的肺匀浆上清液诱导能力更强。
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