白血病是一种常见的恶性肿瘤性疾病。每年中国死于白血病的患者数以万计。传统的癌症治疗包括手术、放化疗等疗法,但这些传统治疗方法疗效有限,且对患者副作用过大。。因此基因治疗是近年来兴起的一种新的生物治疗方法,其通过外源导入治疗基因到癌症患者处来发挥治疗效力的一种治疗手段。而一种靶向性基因-病毒策略得到了广泛的应用。其中溶瘤腺病毒(肿瘤特异性增殖腺病毒)特异性地靶向感染肿瘤细胞并特异性地在肿瘤细胞内复制、增殖,最终导致肿瘤细胞裂解,其子代病毒扩散可进一步感染周围肿瘤细胞,并造成肿瘤细胞裂解,最终可感染整个肿瘤组织,从而完全消灭肿瘤细胞。同时溶瘤腺病毒又可以携带抗癌基因,使抗癌基因伴随病毒大量表达,同时发挥病毒治疗和基因治疗的双重功能。研究表明溶瘤腺病毒的载体构建主要通过以下三种方式：1,利用肿瘤特异性或组织特异性启动子来控制病毒复制必须基因的表达；2,利用缺失某些病毒基因,使其在正常细胞复制必需,而在肿瘤细胞复制非必需；3,改造病毒的纤维蛋白(fiber)以决定病毒感染嗜向性。因此赋予病毒的靶向肿瘤细胞的选择性增殖能力。我们以此为基础构建了特异性靶向白血病肿瘤细胞的溶瘤腺病毒AdCN205-11-gene.并在此基础上选择了治疗基因研究其作用于白血病细胞的分子机制。本课题所构建的是一种利用人端粒酶逆转录酶;hTERT)启动子调控腺病毒E1A基因,同时缺失E1A序列上该基因产物CR2区与Rb蛋白结合所必需的24bp,并具有Ad5骨架和Ad11 fiber的嵌合型溶瘤腺病毒Ad5/F11。该病毒既具有Ad5的安全性,又具有Ad11的靶向性。同时选择的抗癌基因Mda-7/IL-24,是一种具有广泛抗肿瘤作用的分泌型糖蛋白,能够促进肿瘤细胞凋亡,具有潜在的旁观者效应,可以提高放射疗效、诱导免疫调节反应和抑制肿瘤血管生成。研究表明AdCN205-11-IL-24有机地结合了病毒治疗与基因治疗的特点,具有特异的肿瘤靶向性、抑制肿瘤效果等特点,为治愈白血病癌症研究带来新的思路。核糖核苷酸还原酶(RR)存在于所有的生物细胞中,其功能是将核糖核苷酸(NDPs)还原为脱氧核糖核苷酸(dNDPs),是DNA合成限速酶,为DNA正常复制和损伤修复提供原料-RR的存在直接影响细胞增殖及肿瘤发生发展,是目前筛选抗肿瘤药物的重要靶标分子。RR结构和功能研究为阐明其酶活性机制和研发靶向抗肿瘤药物提供理论和实验依据。根据金属辅助因子不同,RR可分为三类,而基于序列同源性和别构调节机制,第1类又可进一步分为Ia,Ib, and Ic三个亚类,人、鼠和大肠杆菌等的RR属于Ia亚类。目前对Ia RR结构和功能的研究主要是以大肠杆菌为模板,其中经典模型认为它是两个R1大亚基和两个R2小亚基组成的异四聚体。近年发现人细胞具有两种亚基组成形式的RR,分别在细胞周期S期DNA正常复制和DNA损伤修复时发挥作用。蛋白质的翻译后修饰是生物体内重要的调控结构和功能的方式,然而这种重要功能在RR所起的作用还不被人们知道。其中重要的乙酰化修饰功能是在将乙酰基部分的传送从乙酰-CoA到一个特定的赖氨酸残基的ε-氨基生成乙酰基赖氨酸(AcK),同时在赖氨酸乙酰基转移酶(KATs)和去乙酰基转移酶(KDACs)家族的作用下产生可逆的动态平衡,调控蛋白质的稳定性。我们首次发现并研究了赖氨酸的翻译后乙酰化修饰对RR的重要作用。我们利用泛乙酰化抗体进行检测发现hRRM2小亚基可发生乙酰化修饰。免疫沉淀法表明CBP介导hRRM2的乙酰化修饰。为探索hRRM2乙酰化修饰位点,我们将hRRM2与CBP共表达后检测乙酰化程度,并用串联LC-MS/MS质谱法检测到hRRM2小亚基的第23,30,46,59,61位的赖氨酸(K)发生乙酰化修饰。在分别构建了hRRM2的五个质谱检测到的突变体将赖氨酸(K)分别突变为精氨酸(R)(K23R, K30R, K46R, K59R, K61R),并与CBP共表达后检测乙酰化程度。结果表明,与野生型hRRM2相比,五个单突变体的乙酰化程度分别显著降低。当我们将所有经质谱检测得到的赖氨酸乙酰化位点进行全突变,并与CBP共表达后检测乙酰化程度。实验证明,与野生型]hRRM2相比,没有检测到乙酰化现象。以上结果表明,hRRM2小亚基的第23,30,46,59,61位的赖氨酸(K)位点发生乙酰化修饰,并根据初步推测可能与hRRM2的功能有关。最近的蛋白质组学研究揭示,哺乳动物蛋白质的5-10%存在赖氨酸乙酰化现象即蛋白质的翻译后修饰。我们的结果为进一步阐明RR酶分子在细胞内作用机制具有重要意义,这也为设计新的抗肿瘤药物提供了重要实验依据。