论文部分内容阅读
第一部分 他汀对急性心肌梗死合并糖尿病患者直接PCI术后的影响研究背景:术前应有高负荷剂量的他汀对急性心肌梗死合并糖尿病患者行直接PCI的疗效和安全性尚不清楚。目的:探讨负荷剂量的他汀对急性心肌梗死合并糖尿病患者行直接PCI的疗效和安全性。方法:选取急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI)合并糖尿病准备行直接PCI患者140例,随机分阿托伐他汀负荷组35例,常规组35例,瑞舒伐他汀负荷组35例,常规组35例,检测PCI术前、术后2h hs-CRP、血清淀粉样蛋白(SAA)、谷丙转氨酶(ALT)、肌钙蛋白I(cTnI)、脑钠肽(BNP)、内皮素(ET-1)、NO、纤溶酶原激活物(t-PA)、纤溶酶原激活物抑制物(PAI-1)、丙二醛(MDA)和超氧化歧化酶(SOD)。比较术后ST段回落指数(STR)、校正TIMI帧计数(CTFC)、30d心脏彩超和主要不良事件(MACE)。结果:术后各组 2h hs-CRP、SAA、cTnI、NO、t-PA 升高,但 hs-CRP、SAA、BNP、cTnI负荷组低于常规组,NO、t-PA负荷组高于常规组;ET-1、PAI-1降低,负荷组低于常规组(P<0.05);术后2h MDA升高,SOD降低,负荷组MDA升高较常规组低;负荷组SOD降低较常规组低(P<0.05);2hSTR、CTFC、30dLVEF和不良事件发生率,负荷组优于常规组(P<0.05),两负荷组比较无统计学差异(P>0.05)。结论:STEMI合并糖尿病患者行直接PCI前应用负荷剂量他汀能降低氧化应激,可以减少心肌细胞坏死,改善短期预后,阿托伐他汀与瑞舒伐他汀无显著差异。第二部分 大鼠心肌微血管内皮细胞的分离、培养及鉴定目的:探讨应用酶消化法分离成年大鼠心肌微血管内皮细胞的可行性,以获得较高纯度和活性的细胞。方法采用酶消化法分离大鼠心肌微血管内皮细胞并进行培养、传代,应用dil标记的乙酰化低密度脂蛋白(dil-acetylated-low density lipoprotein,Dil-Ac-LDL),对传代的细胞进行鉴定。结果酶消化法可以获得心肌微血管内皮细胞,酶消化法具有获得所需的细胞时间相对短,稳定可靠,细胞纯度高等特点。结论使用酶消化法可获得纯度高、状态良好的心肌微血管内皮细胞,用该方法培养的细胞可用于后续试验。第三部分 他汀对高糖环境下心肌微血管内皮细胞的保护作用及机制研究目的:研究他汀对高糖环境下心肌微血管内皮细胞的保护作用及其机制。方法:建立糖尿病大鼠模型,应用阿托伐他汀(10mg/kg/天)、瑞舒伐他汀(5mg/kg/天)或安慰剂鼻饲1周,解剖主动脉,应用western blot分析SmgGDS表达情况,培养大鼠心肌微血管内皮细胞,将细胞分成对照组,高血糖组,单纯阿托伐他汀处理组,阿托伐他汀+高糖组,使用超化物测定试剂盒检测活性氧(ROS)水平,以末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法(TUNEL)检测细胞凋亡。利用小RNA干扰(siRNA)技术,下调内皮细胞蛋白激酶B1(Akt1)和β1-整合素(β1-Integrin)的表达,采用western blot检测小GTP结合蛋白解离刺激物(SmgGDS)表达水平。结果:(1)SmgGDS在糖尿病大鼠主动脉内皮中表达;(2)高糖组ROS水平高于对照组(t=4.154,P<0.01),阿托伐他汀组和阿托伐他汀+高糖组ROS水平均低于高糖组(t=4.233和2.893,P均<0.05)。(3)TUNEL法检测细胞凋亡显示:高葡萄糖组细胞凋亡比例高于对照组(t=4.058,P<0.01),阿托伐他汀组和阿托伐他汀+高糖组细胞凋亡比例均低于高葡萄糖组(t=4.157和2.601,P均<0.05)。(4)转染Akt1-siRNA后,与模拟组相比,高糖组和高糖+阿托伐他汀组的Akt1的表达水平均降低(t=4.058和4.167,P均<0.01);转染β1-integrin-siRNA后,与模拟组相比,高糖组和高糖+阿托伐他汀组的β1-integrin的表达水平均降低(t=4.073和4.215,P均<0.01)。(5)Western blot检测显示:阿托伐他汀低剂量组(1umol/L)和阿托伐他汀高剂量组(10umol/L)心肌微血管内皮细胞的SmgGDS相对表达水平均高于对照组(t=2.671和2.832,P均<0.05),高剂量组的SmgGDS相对表达水平高于低剂量组(t=2.612,P<0.05);转染Akt1-siRNA后,高糖组和高糖+阿托伐他汀组的SmgGDS表达水平均降低,高糖+阿托伐他汀+模拟组的SmgGDS表达水平高于高糖+模拟组(t=4.051,P<0.01);转染βI-integrin-siRNA后,高糖组和高糖+阿托伐他汀组的SmgGDS表达水平均低于高糖+阿托伐他汀+模拟组,高糖+阿托伐他汀+模拟组的SmgGDS表达水平高于高糖+模拟组(t=4.068,P<0.01);高糖组和高糖+阿托伐他汀组Akt磷酸化随时间变化的表达水平显示:1Omin后,高糖+阿托伐他汀组Akt磷酸化表达水平高于5min后(t=2.608,P<0.05,15min后Akt磷酸化表达水平高于10min后(t=3.127,P<0.05);β1-integrin-siRNA转染高糖组与高糖+模拟组比较,p-Akt/t-Akt 降低(t=3.371,P<0.05)。结论:他汀可以保护糖尿病心肌微血管内免受氧化应激和细胞凋亡,这种保护作用部分是通过他汀依赖β1-Integrin/Akt1途径,上调SmgGDS实现的。