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胶原蛋白是一种重要的结构蛋白,其水解产物胶原蛋白肽具有抗氧化、抗菌、预防骨质疏松症等生物活性,提取胶原蛋白所使用的原料多为鱼鳞、鱼皮、猪皮等,提取出来的胶原蛋白主要为Ⅰ型胶原蛋白。珍珠贝外套膜中含有的胶原蛋白主要为类Ⅴ型,与Ⅰ型胶原蛋白在氨基酸组成和排列上有较大区别。本研究以珍珠贝外套膜为原料,采用热水提取法获得水溶性胶原蛋白,利用不同的蛋白水解酶制备胶原蛋白肽。采用G-25葡聚糖凝胶层析法分离不同分子量组分胶原蛋白肽,通过测定其DPPH自由基和羟基自由基清除率筛选抗氧化活性最高的多肽组分。同时,利用小鼠MC3T3-E1细胞体外抗氧化模型,分析胶原蛋白肽对抗霉素A (AMA)诱导的MC3T3-E1细胞氧化损伤的保护作用。主要内容如下：1、珍珠贝外套膜胶原蛋白的制备及其性质珍珠贝外套膜中粗蛋白含量为9.80g/100g(以湿基计),蛋白质含量较丰富。胶原蛋白含量为5.60%(以湿基计),占粗蛋白含量的57.14%。采用热水法提取外套膜中的胶原蛋白,提取率为5.60%(以干基计)。经氨基酸组成分析得知,外套膜胶原蛋白中富含酸性氨基酸。珍珠贝外套膜胶原蛋白在202nm处有最大吸收峰,而在280nm、275nm和257nm处无吸收峰。2、珍珠贝外套膜胶原蛋白肽的制备及其抗氧化活性利用碱性蛋白酶、碱性蛋白酶+中性蛋白酶、碱性蛋白酶+中性蛋白酶+酸性蛋白酶酶解胶原蛋白,得到POMCP1、POMCP2、POMCP3三种胶原蛋白肽。通过测定三种胶原蛋白肽的DPPH自由基清除率、羟基自由基清除率以及还原力得知,POMCP2的抗氧化活性最高,DPPH自由基清除率、羟基自由基清除率以及还原力分别为65.09%、41.36%和0.058。3、G-25葡聚糖凝胶色谱分离纯化抗氧化活性肽采用G-25葡聚糖凝胶色谱柱对POMCP2按分子量进行分离,得到P1、P2和P3三个组分。其中,P1的分子量约为66430Da, P2、P3的分子量在300-600Da之间。通过测定三个组分的DPPH自由基清除率、羟基自由基清除率和还原力得知,P2的抗氧化活性高于P1和P3。4、胶原蛋白肽对AMA诱导的MC3T3-E1细胞氧化损伤的保护作用以小鼠MC3T3-E1细胞为体外抗氧化模型,以AMA为活性氧生成剂,研究了珍珠贝外套膜胶原蛋白肽对MC3T3-E1细胞氧化损伤的保护作用。当AMA添加量为80μmol/L,处理时间为48h时,对细胞产生的氧化效果较为明显,可显著影响细胞的正常生长,因此确定上述条件为抗氧化模型的实施条件。珍珠贝外套膜胶原蛋白肽对MC3T3-E1细胞无毒性作用,且多肽预处理组的细胞活力高于AMA单独处理组。POMCP1, POMCP2和POMCP3三种多肽组分中,POMCP2预处理组的细胞活力最高。POMCP2经G-25葡聚糖凝胶色谱分离得到的三个组分中,P2预处理组的细胞活力高于P1和P3预处理组,当P2的添加浓度在0.10-0.80mg/mL范围内时,细胞活力随多肽浓度的升高而增强,当胶原蛋白肽的浓度达到1.60mg/mL时,细胞活力稍有下降。此外,MC3T3-E1细胞经P2预处理后,碱性磷酸酶活力和矿化能力显著(p<0.05)提高,且该促进作用呈剂量依赖性。