【摘 要】
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根据Genbank发表的布鲁氏菌bp26基因和OMP10基因分别设计合成一对特异性引物,提取11株实验室分离的呼和浩特地区布鲁氏菌和两株参考布鲁氏菌的总DNA为模板,通过聚合酶链式反
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根据Genbank发表的布鲁氏菌bp26基因和OMP10基因分别设计合成一对特异性引物,提取11株实验室分离的呼和浩特地区布鲁氏菌和两株参考布鲁氏菌的总DNA为模板,通过聚合酶链式反应(PCR)技术扩增得到bp26和OMP10基因,回收纯化后将这两个基因分别连接到PMD18-T载体上,热激发转化受体菌大肠杆菌DH5α,蓝白斑筛选阳性克隆,提取质粒后进行序列测定。测序结果显示,bp26基因全长为995bp,包含一个由753bp组成的完整开放阅读框架,编码250个氨基酸。11株分离菌株的同源性为100%,与疫苗株M5、S2的同源性分别为100%和99.9%,与参考菌株S19、870的同源性分别为99.9%和100%。OMP10基因全长531bp,包含一个由381bp组成的完整开放阅读框架,编码126个氨基酸。11株分离菌株的同源性为100%,与疫苗株M5、S2的同源性均为100%,与参考菌株544的同源性为99.7%。为了弥补血清学和微生物学方法检测和诊断布鲁氏菌病的种种不足,本研究建立了用聚合酶链反应(PCR)快速检测布鲁氏菌病原的方法。根据编码牛种布鲁氏菌31KDa外膜蛋白基因序列设计了一对特异性引物,成功地扩增出预期350bp的基因片段,此方法具有较高的特异性和敏感性,DNA最低检测量为0.42pg。该布鲁氏菌病原PCR快速检测方法的建立,对布鲁氏菌病的检疫及快速诊断具有十分重要的意义。
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