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背景和目的随着人口的老龄化发展,血管性痴呆(vascular dementia, VD)成为导致痴呆的第二大病因。由于本病具有患病率和致残率高、病程长及治疗费用高等特点,给病人的家庭和社会带来了巨大的负担,因此VD的治疗愈来愈受到人们的关注。盐酸美金刚是非竞争性N-甲基-D-天门冬氨酸(N-methyl-D-aspartate, NMD A) NMDA受体拮抗剂,目前的研究显示其对VD有效,但其改善VD学习记忆功能的具体机制目前还不清楚。环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(cAMP responsive element binding protein, CREB)是一种真核生物细胞核内的转录因子,是长时程记忆形成的“分子开关”；细胞色素C(Cytochrome C, CytC)从线粒体到胞浆释放增多,将导致细胞凋亡。但是在VD大鼠模型中,是否存在着CREB及细胞色素C的变化；美金刚是否通过影响CREB的表达及细胞色素C的释放而达到改善学习记忆功能,目前还均未见报导。基于此,本研究通过建立血管性痴呆大鼠模型,观察美金刚治疗前后CREB及细胞色素C的表达变化,探讨美金刚治疗VD的可能机制。方法第一部分,以SD大鼠为研究对象,采用双侧颈总动脉永久结扎法来制备VD动物模型,随机分为假手术组、模型组、美金刚组；造模术后美金刚组给予盐酸美金刚.3mg/kg(溶解于生理盐水中)灌胃,每日1次,共8w；假手术组和模型组则给予等量的生理盐水灌胃,每日1次,共8w。各组大鼠分别于灌胃结束后应用Y型迷宫实验对其进行学习和记忆能力测试。学习成绩越大,表示学习能力越差；记忆成绩越大,表明记忆能力越好。第二部分采用HE染色及Nissl染色观察各组大鼠海马组织的病理改变,采用SP免疫组化技术,观察各组大鼠海马组织CREB及细胞色素C的表达变化,采用Qwin550CW图像处理与分析系统,测定CREB及细胞色素C阳性反应物质的平均灰度值；采用TUNEL法检测凋亡细胞,并统计凋亡细胞的数量,以百分比作为统计学指标。结果1 Y迷宫试验：假手术组大鼠学习成绩最小,记忆成绩最大；模型组学习成绩最大,记忆成绩最小,表明模型组学习记忆能力下降,与假手术组比较有统计学意义(P＜0.01)；美金刚组较模型组学习记忆能力改善(P＜0.01)。2 HE染色：假手术组海马CA1区神经元排列规则致密,细胞核大而圆,核仁清晰；模型组海马神经元结构紊乱,排列疏松,细胞核固缩,深染；美金刚组神经元排列较紧密,细胞核圆,核仁清晰,仅见少量固缩变性的神经元。3 Nissl染色：假手术组神经元清晰,细胞结构完整,胞浆中布满着深蓝色呈颗粒状的尼氏体；模型组细胞皱缩变形、体积变小、胞浆尼氏体着色浅淡；美金刚组神经元较清晰,细胞结构较完整,胞浆尼氏体较为丰富。4 SP法检测海马区CREB的表达变化：CREB阳性表达产物呈棕黄色,位于细胞浆和细胞核内。假手术组可见大量阳性细胞表达,在细胞浆和细胞核内均可见大量的棕黄色颗粒,染色较深；而模型组CREB阳性细胞数目减少,着色较淡；美金刚组阳性细胞较模型组增多,染色变深。CREB阳性反应产物平均灰度值结果显示：模型组明显低于假手术组(P＜0.01),而美金刚组较模型组有所升高,与模型组比较有显著性差异(P＜0.01)。5 SP法检测细胞色素C的表达：细胞胞浆中有棕黄色颗粒者为阳性细胞。假手术组胞浆着色最淡；模型组着色最重,可见大量胞浆着色的阳性细胞,细胞色素C释放明显增多；美金刚组胞浆呈弱染或者中等强度染色。细胞色素C阳性反应产物平均灰度值比较,模型组高于假手术组(P＜0.01),而美金刚组则较模型组降低(P＜0.01)。6细胞凋亡：假手术组可见少量的凋亡细胞表达,表现为细胞核呈棕色或棕褐色着染,核形不规则；模型组见大量凋亡细胞；美金刚组凋亡细胞较模型组减少。凋亡细胞计数百分比结果显示,模型组凋亡细胞百分比较假手术组升高(P＜0.01),而美金刚组则较模型组显著降低,具有统计学差异(P＜0.01)。结论1 VD大鼠海马CREB的表达下降,细胞色素C从线粒体释放到细胞质的过程,可能与大鼠的学习记忆能力受损有关。2盐酸美金刚可能通过抑制NMDA受体,增加CREB的表达,抑制细胞色素C的释放,达到改善VD大鼠的学习记忆能力。