藿香正气口服液是由藿香、紫苏、白芷、半夏、厚朴、苍术、茯苓、陈皮、大腹皮、甘草等十味中草药组成,具有解表化湿,理气和中的功效,临床上主要用于治疗头痛昏重,胸膈痞闷,脘腹胀痛,呕吐泄泻等症。其化学成分组成复杂,当前对于藿香正气口服液的药效物质基础与质量控制研究有限。因此,亟需应用现代仪器分析技术及多学科交叉研究方法,分析其药效成分以及阐明药效成分的体内作用过程,并建立有效的质量控制方法。本实验基于高效液相色谱（UPLC）、液质（LC-MS）、气质联用（GC-MS）等技术,综合运用指纹图谱分析、化学成分分析、血清药物化学和体内代谢分析以及多成分含量测定等研究方法,以实现藿香正气口服液化学成分的全面表征、入血成分和尿粪代谢转化分析以及整体的质量控制研究。目的:全面表征化学成分组成,建立藿香正气口服液质量控制方法;并明确其入血成分以及体内代谢过程,总结代谢转化途径,为藿香正气口服液物质基础研究提供科学依据。方法:1.通过优化液相色谱的流动相、固定相、柱温以及洗脱梯度,建立藿香正气口服液UPLC指纹图谱;其次基于超高效液相色谱串联四极杆飞行时间高分辨质谱技术（UHPLC-QTOF-MS）,采用优化的最佳质谱参数条件,选择MSE扫描模式在正、负离子模式下采集数据。通过自建数据库、创建UNIFITM化学成分筛查分析方法,全面表征藿香正气口服液的化学成分。2.采用顶空固相微萃取-气质联用技术（HS-SPME-GC-MS）,通过优化萃取头、萃取时间和温度以及解析时间等关键参数,构建了藿香正气口服液挥发性成分GC-MS指纹图谱;其次,HS-SPME-GC-MS与气相离子迁移谱技术（GC-IMS）结合鉴定藿香正气口服液中的挥发性有机化合物。3.采用超高效液相色谱串联四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱（UHPLC/Q-Orbitrap-MS）和GC-MS联用技术分析口服藿香正气口服液SD大鼠的血浆、尿液和粪便样本中的成分,以明确其入血原型成分和体内代谢产物,并总结体内代谢途径。4.最后,采用UHPLC/Q-Orbitrap-MS技术的的平行反应监测模式（PRM）,同时定量9个指标成分,实现多批次藿香正气口服液的质量控制。结果:1.建立了 15批次藿香正气口服液UPLC指纹图谱,并通过对照品对照确认22个共有峰中的7个成分,分别为橙皮苷、甘草苷、和厚朴酚、甘草酸、厚朴酚、芸香柚皮苷和水合氧化前胡素。方法学验证显示,该方法具有一定的专属性,且精密度、重复性和稳定性数据RSD均小于2.0%,所建立的UPLC指纹图谱能够评价藿香正气口服液制剂的质量。基于UHPLC-QTOF-MSE的非靶向数据采集模式分析样品,将包含601成分的自建数据库导入UNIFITM数据处理软件中,并创建筛查分析方法,最终共鉴定出195种化合物,主要包括三萜皂苷类、黄酮类、三萜酸类、木脂素类、香豆素类、苯乙醇苷类、生物碱类、倍半萜类等成分,其中47种化合物通过比对标准品鉴定。2.基于HS-SPME-GC-MS技术检测藿香正气口服液样品,通过与NIST17数据库对比质谱碎片,以及将计算的样品成分保留指数（C8～C20正构烷烃校正后的,RI）与标准物质在库中的RI值比较,共鉴定出61种挥发性成分,主要为广藿香醇、β-广藿香烯等。基于该方法,建立了 15批次藿香正气口服液挥发性成分指纹图谱的共有模式,并确认了 26个共有峰,且指纹图谱相似度大于0.95。应用GC-IMS技术分析了藿香正气口服液中C2-C10的小分子挥发性化合物,根据内置的NIST14数据库与迁移时间数据库,对信号峰进行二维定性分析,最后根据数据库鉴定出35个信号峰（含有二聚体）。通过GC-MS与GC-IMS技术分析,藿香正气口服液中挥发性化合物主要包括倍半萜烃类、单萜烃类、萜醇类和醛类等,以及小分子萜类、酮类、醛类和酯类等。该方法扩大了挥发性组分的检测范围、丰富了化合物种类。3.基于UHPLC/Q-Orbitrap-MS和GC-MS方法分析了大鼠口服藿香真正气口服液后入血原型成分,以及血浆、尿液和粪便中代谢产物。从血样中检测到了 55个原型化合物,其中6个为挥发性入血成分,主要为甘草苷、甘草素和川陈皮素等黄酮类成分,甘草酸、甘草次酸三萜皂苷类成分,茯苓新酸A、去氢土莫酸等三萜酸类成分,水合氧化前胡素等香豆素类成分,和厚朴酚、Magnolignan C、厚朴酚等木脂素类成分,以及β-广藿香烯、α-蒎烯、α-广藿香烯、δ-蒎烯等萜类挥发性成分。这些成分主要来源于甘草、陈皮、厚朴、白芷、茯苓、藿香和紫苏,推测这些成分可能是藿香正气口服液中的药效成分。采取Compound discover软件建立Workflows分析生物样品,最终从血、尿和粪便中共鉴定出219个代谢产物,并选取体内含量高、吸收较好的代表性化合物总结了代谢途径。本实验中检测到的入血原型成分和代谢产物可能为藿香正气口服液的主要药效成分,为后续药效研究奠定了基础。4.基于以上入血成分研究结果,将具有代表性的且体内含量较高的入血原型成分作为藿香正气口服液含量测定的指标成分。采用UHPLC/PRM（ESI+/ESI-切换）模式,建立了甘草酸、橙皮苷、水合氧化前胡素、芸香柚皮苷、川陈皮素、和厚朴酚、茯苓新酸A、厚朴酚和甘草苷9种成分的含量测定方法。方法学验证结果显示,9种化合物在一定范围内线性关系良好（R2≥0.9990）,精密度、稳定性、重复性数据RSD＜3.0%,加样回收率在90%-105%之间。该方法应用于15批藿香正气口服液制剂的含量测定,结果显示甘草酸的含量最丰富,而茯苓新酸A含量最低,且厚朴酚、和厚朴酚以及橙皮苷的含量测定结果均符合药典规定。结论:本课题基于超高效液相色谱、液质联用、气质联用、气相离子迁移谱等技术首次对藿香正气口服液体外化学成分进行全面表征和定量分析,并建立了 UPLC指纹图谱以及GC-MS挥发性成分指纹图谱,明确了全方的化学组成并实现了藿香正气口服液制剂的整体质量控制。此外首次对给药后大鼠血浆、尿液和粪便样本中原型化合物和代谢产物进行表征,得到其较全面的体内代谢谱,并总结了代谢途径。本研究对藿香正气口服液的指纹图谱、化学成分分析、入血成分和体内代谢过程、以及指标成分含量测定进行了系统研究,初步阐述了藿香正气口服液的药效物质基础,也为其质量控制方法及临床研究提供依据。