【摘 要】
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结直肠癌是最常见的消化系统恶性肿瘤,具有发病率高,预后差的特点,而结直肠癌转移是影响其治疗效果和导致患者不良预后的最主要原因。地中海饮食可以降低结直肠癌风险。油酸（Oleic acid,OA）是地中海饮食中主要的单不饱和脂肪酸,对健康有诸多益处。已有部分研究报道OA在多种类型肿瘤细胞中影响细胞侵袭和迁移。然而,关于OA在人结直肠癌细胞侵袭和迁移过程中的作用,我们知之甚少。因此,本文将以人结直肠癌H
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结直肠癌是最常见的消化系统恶性肿瘤,具有发病率高,预后差的特点,而结直肠癌转移是影响其治疗效果和导致患者不良预后的最主要原因。地中海饮食可以降低结直肠癌风险。油酸（Oleic acid,OA）是地中海饮食中主要的单不饱和脂肪酸,对健康有诸多益处。已有部分研究报道OA在多种类型肿瘤细胞中影响细胞侵袭和迁移。然而,关于OA在人结直肠癌细胞侵袭和迁移过程中的作用,我们知之甚少。因此,本文将以人结直肠癌HCT116、HT-29、SW480和LoVo细胞作为研究对象,用OA孵育细胞,探讨OA在人结直肠癌细胞侵袭和迁移过程中的调控作用及潜在分子机制。目的利用油酸孵育培养人结直肠癌HCT116、HT-29、SW480和LoVo细胞,探明油酸在人结直肠癌细胞侵袭和迁移过程中的调控作用及潜在分子机制。方法通过侵袭迁移和划痕愈合实验考察OA对人结直肠癌细胞侵袭和迁移能力的影响,同时通过Western blot考察OA对人结直肠癌细胞上皮-间充质转化（Epithelial-mesenchymal transition,EMT）标签蛋白的影响。通过 CCK8 实验探究OA对人结直肠癌细胞增殖能力的影响。运用基于SILAC定量蛋白组学技术研究OA对人结直肠癌HCT116细胞全蛋白表达谱的影响,并对差异蛋白参与调控的生物过程和信号通路进行生物信息学分析。应用ELISA实验研究OA对人结直肠癌细胞培养基中转化生长因子-β1（Transforming growth factor-β1,TGF-β1）水平的影响。利用核浆蛋白分离和免疫荧光实验检测OA对人结直肠癌细胞中Smad蛋白核易位的影响。通过Western blot和免疫共沉淀实验检测OA对人结直肠癌细胞中EP300蛋白表达水平的影响。通过免疫沉淀和Western blot实验研究OA对人结直肠癌细胞中Smad蛋白乙酰化修饰的影响。通过乙酰辅酶A测定试剂盒和Western blot实验研究OA对人结直肠癌细胞中Acetyl-CoA水平的影响。通过Western blot实验研究OA对人结直肠癌细胞中H3组蛋白乙酰化修饰的影响。结果OA通过下调上皮细胞标志蛋白E-cadherin负向调控因子ZEB1和Twist1的蛋白表达水平,促进E-cadherin的表达,从而抑制人结直肠癌细胞的EMT进程及其侵袭迁移过程。OA对人结直肠癌细胞增殖能力无显著影响。基于SILAC定量蛋白组学实验显示OA可能参与人结直肠癌HCT116细胞钙黏着蛋白结合、黏着斑形成、细胞迁移以及组蛋白去乙酰化等生物过程;差异蛋白多富集于TGF-β信号通路等;翻译后修饰（Post-translational modification,PTM）富集分析显示差异蛋白多涉及乙酰化修饰。OA通过降低胞外TGF-β1水平抑制人结直肠癌细胞中的TGF-β/SMAD信号通路。OA通过降低Smad2/3的磷酸化水平和EP300的蛋白水平阻碍Smad蛋白复合物的核易位从而阻断TGF-β/SMAD信号通路。OA通过下调ACLY和ACSS1/2的表达,阻断Acetyl-CoA的来源,降低Smad2和H3组蛋白的乙酰化水平。同时,OA通过上调Sirtuins和下调EP300蛋白的表达协同抑制H3组蛋白的乙酰化修饰,抑制下游靶基因Snail和Slug的表达,从而抑制人结直肠癌细胞的侵袭和迁移。结论1.OA通过下调转录抑制因子ZEB1和Twist1的表达,上调E-cadherin的表达,抑制人结直肠癌细胞的侵袭迁移。2.OA通过下调TGF-β1水平,降低Smad2/3的磷酸化水平,下调EP300的蛋白表达水平,阻碍Smad蛋白复合物的核易位过程,抑制TGF-β/SMAD信号通路的传导。3.OA通过下调ACLY和ACSS1/2的表达,降低细胞内Acetyl-CoA水平,下调EP300和上调Sirtuins的表达,降低Smad2和H3组蛋白的乙酰化水平,下调TGF-β/SMAD通路下游靶基因Snail和Slug的表达,从而抑制人结直肠癌细胞的侵袭和迁移。
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