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目的:探讨错配修复基因启动子区甲基化是否影响结肠癌对5-FU化疗的敏感性。方法:（1）采用不同浓度（0、1、5、10、20μg/mL）5-氮杂胞苷诱导细胞株HT-29、SW480错配修复基因启动子区脱甲基化,用甲基化特异性PCR检测hMSH2和hMLH1启动区甲基化水平,筛选可改变hMSH2和hMLH1启动区甲基化水平的最佳浓度。（2）采用不同浓度（0、10、20、50、100、200μg/mL）5-FU作用于细胞株HT-29、SW480,用CCK8检测细胞成活率,确定细胞株对5-FU最敏感的药物浓度。（3）将细胞株分为三组:对照组（不加5-Aza和5-FU）、5-FU组（加100μg/mL,不加5-Aza）、5-Aza+5-FU组（同时加10μg/mL 5-Aza和100μg/mL 5-FU）,PCR检测两种结肠癌细胞株hMLH1和hMSH2 mRNA水平;Western Blot检测两种结肠癌细胞株hMLH1和hMSH2蛋白水平;流式细胞仪检测两种结肠癌细胞株凋亡水平。（4）构建结肠癌原位移植瘤小鼠模型;（5）将结肠癌原位移植瘤模型小鼠分为三组:对照组（不加5-Aza和5-FU）、5-FU组(注射剂量为2.5 mg·kg-1·d-1,每周2次,持续4周)、5-Aza+5-FU组(同时注射5-Aza和5-FU,注射剂量为25 mg·kg-1·d-1,每周2次,持续4周),每组10只。观察小鼠结肠癌原位移植瘤大小,并采用PCR检测移植瘤hMLH1和hMSH2 mRNA水平;Western Blot检测移植瘤hMLH1和hMSH2蛋白水平和细胞凋亡水平。结果:（1）在一定5-Aza浓度范围内,细胞株HT-29、SW480 hMLH1和hMSH2启动子区的甲基化程度随着5-Aza浓度升高而降低,最佳5-Aza浓度为10μg/mL。（2）不同浓度5-Aza对细胞株HT-29、SW480的存活率无明显影响,相比之下,细胞株HT-29、SW480的存活率随着5-FU浓度的增加而降低,最佳5-FU浓度为100μg/mL;当200μg/mL≥5-FU浓度≥20μg/mL时,5-Aza组细胞株的生存率明显低于对照组（p<0.05）。（3）细胞株HT-29和SW480中,5-FU组hMLH1和hMSH2 mRNA水平和蛋白水平都与对照组无明显差异（p>0.05）,5-Aza+5-FU组hMLH1和hMSH2 mRNA水平和蛋白水平明显高于5-FU组和对照组（p<0.05）。（4）细胞株HT-29中,5-FU组凋亡细胞数（51.9%）和5-Aza+5-FU组凋亡细胞数（65.5%）都明显多于对照组（3%）（p>0.05）。5-Aza+5-FU组凋亡细胞数明显高于5-FU组凋亡细胞数（p<0.05）;细胞株SW480中,5-FU组凋亡细胞数（40.2%）和5-Aza+5-FU组凋亡细胞数（53%）都明显多于对照组（1.8%）（p>0.05）。5-Aza+5-FU组凋亡细胞数明显高于5-FU组凋亡细胞数（p<0.05）。（5）5-FU组10只小鼠结肠癌移植瘤体积明显小于对照组（p<0.05）,5-FU+5-Aza组小鼠结肠癌移植瘤平均体积明显小于5-FU组,结果具有统计学意义（p<0.05）。（6）5-FU组结肠癌原位移植瘤hMLH1和hMSH2 mRNA水平和蛋白水平都与对照组无明显差异（p>0.05）,5-Aza+5-FU组hMLH1和hMSH2 mRNA水平和蛋白水平明显高于5-FU组和对照组（p<0.05）,与体外实验结果基本一致。（7）5-FU组和5-Aza+5-FU组结肠癌移植瘤组织中抑制凋亡蛋白Bcl-2的蛋白水平都明显低于对照组（p<0.05）,且5-Aza+5-FU组Bcl-2明显低于5-FU组（p<0.05）。5-FU组和5-Aza+5-FU组结肠癌移植瘤组织中促凋亡蛋白Bax的蛋白水平都明显高于对照组（p<0.05）,且5-Aza+5-FU组Bax明显高于5-FU组（p<0.05）。结论:细胞株HT-29和SW480以及结肠癌原位移植瘤中,hMLH1和hMSH2启动子区甲基化会降低结肠癌对5-FU的敏感性,原因可能是hMLH1和hMSH2启动子区发生甲基化后,hMLH1和hMSH2 mRNA转录失活导致基因表达沉默或下调,细胞的错配修复功能降低或丧失,细胞无法识别受损的DNA,诱导细胞凋亡的能力也下降,产生对5-FU耐受的突变体,导致结肠癌细胞化疗敏感性降低。