黄曲霉毒素(Aflatoxins，AFT)是黄曲霉(Aspergillus flavus)和寄生曲霉(A．parasiticus)等产生的一组结构类似的次生代谢产物。其中黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1，AFB1)是迄今发现的毒性最大、致癌性最强的一种真菌毒素。调查表明，世界范围内AFT污染十分普遍。因此，AFT受到最广泛的重视，各国政府都制定了十分严格的食品中AFT的限量标准。自20世纪六十年代以来，已逐渐探索出了多种AFT。的检测方法。这些方法都曾在各个历史时期为检测AFT作出了一定贡献，但也存在着操作复杂、污染大、对仪器设备要求高、假阳性率高、检测时间长等缺陷。随着时代发展，大部分方法已经不能适应当代社会要求的污染小、灵敏度高、检测时间短及操作简单的检测要求。以免疫分析为基础的准确、快速、无污染、智能化检测技术已成为AFBI快速检测方法研究的热点。其中免疫亲和层析技术由于其对AFT的提取效率高、净化程度高，越来越受研究人员的推崇，该方法是目前公认的最有效的AFB1净化方法。而高亲和力、高灵敏度、质量稳定的抗体是建立理想检测方法的前提，是应首先解决的问题。 本研究的主要内容包括：抗AFB1单克隆抗体的制备和特性鉴定及其免疫亲和柱的初步研制。 目的：通过杂交瘤细胞技术制备抗AFB1单克隆抗体，并对所制备的单克隆抗体进行特性鉴定和初步应用。 方法：(1)以AFB1-BSA作为抗原免疫BALB/c小鼠；(2)取免疫效果最佳的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/O进行融合；(3)以AFB1-OVA作为检测抗原，通过酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)检测杂交瘤细胞的上清进行筛选，保留阳性孔，用有限稀释法进行三次克隆化，得到能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株；(4)探索大量制备和纯化所得抗体的方法和条件；(5)鉴定对所得单克隆抗体的特性(6)初步应用该单克隆抗体，研制AFB1免疫亲和柱。 结果：(1)得到一株能稳定分泌抗AFB1单克隆抗体的杂交瘤细胞株5E10。 此单克隆抗体的亚类为IgG2b，亲和常数是4.79x108M-1，与AFB2、AFG1、AFG2、AFM1的交叉反应率分别为＜26.06％、63.68％、26.06％、38.26％。(2)单克隆抗体的大量制备采用动物体内生产的方法，即以不完全弗氏佐剂(freundsincomplete adjuvant，FIA)为致敏剂预处理12周龄以上的BALB/c小鼠。一周内腹腔注射杂交瘤细胞1～5×106个/只，10天后便可采集腹水；辛酸硫酸铵法(CA-AS)适用于该单抗的大量纯化。(3)初步制备AFB1单抗免疫亲和柱，采用荧光分光光度法确定AFB1单抗免疫亲和柱的使用条件。使用条件为：5mL0.01M PBS(pH7.4)平衡；上样缓冲液中甲醇浓度为10％；上样后2mL超纯水洗涤；1mL80％甲醇-水洗脱，20mL0.01M PBS(pH7.4)再生。制备的AFB1单抗免疫亲和柱其抗体浓度与柱容量的关系为y=85.63x-0.043，其中R2=0.9732。制备柱容量为40ng的免疫亲和柱，使用1次后，柱容量下降至原柱容量的43.6％。结论：杂交瘤细胞株5E10能稳定的分泌目的单克隆抗体，利用该抗体初步研制的AFB1免疫亲和柱的性能仍需进一步优化。