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目的:探究秦巴硒菇提取物FA-2-b-β逆转白血病K562/ADR细胞对阿霉素耐药性及其可能存在的机制。方法:1.细胞培养:体外培养人白血病耐药细胞K562/ADR,及其敏感株K562细胞。2.实验分组:（1）按照秦巴硒菇提取物FA-2-b-β的作用浓度（1、1.5、2.0、2.5、3mg/mL）将耐药细胞K562/ADR、敏感株K562细胞分别分为5组;（2）按照阿霉素（Doxorubicin,ADR）的作用浓度不同,将耐药细胞K562/ADR分为 5 组（5、10、15、20、25 μ mol/L）、将敏感株 K562 细胞分为 5 组（0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 μ mol/L）;此外,根据无毒浓度的秦巴硒菇提取物FA-2-b-β联合不同浓度阿霉素（5、10、15、20、25 μ mol/L）作用于白血病耐药细胞K562/ADR,分为5个处理组;（3）选取秦巴硒菇提取物FA-2-b-β处理后的耐药细胞K562/ADR与敏感株K562细胞优化浓度（1、2、3mg/mL）,将样本分别分为3组,即对应低、中、高剂量组;3.细胞增殖与毒性检测法（Cell counting kit-8,CCK-8）:（1）不同浓度提取物FA-2-b-β（1、1.5、2.0、2.5、3mg/mL）处理耐药细胞K562/ADR、敏感细胞K562 24h、48h、72h后,观察药物分别对两种细胞的增殖率以及抑制率的影响情况;（2）检测通过不同浓度的ADR处理耐药细胞K562/ADR、敏感株K562细胞24h、48h、72h后,阿霉素分别对两种细胞的增殖率以及抑制率的影响情况;（3）检测白血病耐药细胞K562/ADR经过无毒浓度的秦巴硒菇提取物FA-2-b-β处理后,再加入不同的浓度的阿霉素（5、10、15、20、25 μmol/L）,观察其增殖率以及抑制率的变化情况;（4）确定阿霉素对耐药株K562/ADR、敏感株K562两种细胞的IC50,初步探明阿霉素对耐药细胞K562/ADR、敏感株K562两种细胞的最佳处理浓度及处理时间。（5）确定秦巴硒菇提取物FA-2-b-β对耐药株K562/ADR、敏感株K562两种细胞的IC50,初步探明秦巴硒菇提取物FA-2-b-β对耐药株K562/ADR、敏感株K562两种细胞的最佳处理浓度及处理时间,并确定药物用于后续细胞实验的优化浓度。4.细胞凋亡的检测:通过流式细胞术（Flow cytometry,FCM）检测不同浓度秦巴硒菇提取物FA-2-b-β处理72h后耐药细胞K562/ADR的凋亡情况5.细胞内药物蓄积的检测:通过流式细胞术（Flow cytometry,FCM）检测不同浓度秦巴硒菇提取物FA-2-b-β处理72h后耐药细胞K562/ADR中ADR药物蓄积的情况6.实时荧光定量 PCR（quantitative real-time PCR,qRT-PCR）:（1）检测耐药细胞K562/ADR、敏感株K562两种细胞中ABCB1,TP53,BAX,NFKBIA,NF-KB/P65基因的表达情况。（2）不同浓度（1、2、3mg/mL）秦巴硒菇提取物FA-2-b-β处理后,耐药细胞 K562/ADR 中 ABCB1,TP53,BAX,NFKBIA,NF-KB/P65 基因的表达情况。7.蛋白免疫印迹法（Western Blot,WB）:（1）检测耐药株K562/ADR、敏感株K562两种细胞中MDR1,P53,BAX,IkB-α,NF-KB/P65蛋白的表达情况。（2）不同浓度（1、2、3mg/mL）秦巴硒菇提取物FA-2-b-β处理后,耐药细胞中 MDR1,P53,BAX,IkB-α,NF-KB/P65 蛋白的表达情况。结果:1.秦巴硒菇提取物FA-2-b-β抑制耐药细胞K562/ADR及其敏感株K562细胞的增殖:（1）不同浓度秦巴硒菇提取物FA-2-b-β均可抑制耐药细胞K562/ADR、其敏感株K562细胞增殖,且在72h作用最明显,呈现出明显的剂量依赖性。（2）秦巴硒菇提取物FA-2-b-β对耐药细胞K562/ADR及其敏感株K562细胞的IC50 分别是 0.840mg/mL 和 0.852mg/mL。2.秦巴硒菇提取物FA-2-b-β对耐药细胞K562/ADR的逆转作用:（1）不同浓度的ADR单药作用耐药细胞K562/ADR后的IC50为4.092 μ mol/L为,而ADR单药作用于敏感株K562的IC50为0.165 μ mol/L,耐药倍数为24.8倍;（2）阿霉素联合低毒浓度的秦巴硒菇提取物FA-2-b-β对耐药细胞K562/ADR的IC50为3.823 μ mol/L,耐药逆转倍数为1.07倍;与单用ADR相比,ADR和秦巴硒菇提取物FA-2-b-β联用对耐药细胞K562/ADR有明显的抑制作用。3.秦巴硒菇提取物FA-2-b-β促进耐药细胞K562/ADR的凋亡:FCM检测发现随秦巴硒菇提取物FA-2-b-β浓度增加,凋亡率显著增加（P＜0.05）;4.秦巴硒菇提取物FA-2-b-β促进ADR在耐药细胞K562/ADR中的蓄积:FCM检测发现随着秦巴硒菇提取物FA-2-b-β浓度的增加,耐药细胞K562/ADR内阿霉素蓄积量显著增加（P＜0.05）;5.秦巴硒菇提取物FA-2-b-β下调耐药细胞K562/ADR中MDR1、p65蛋白的表达:（1）与敏感株K562相比,耐药株K562/ADR中MDR1、p65蛋白表达显著增加（P＜0.05）;（2）不同浓度秦巴硒菇提取物FA-2-b-β干预后,耐药细胞K562/ADR中MDR1、p65蛋白表达逐渐降低（P＜0.05）。6.秦巴硒菇提取物FA-2-b-β上调耐药细胞K562/ADR中p53、IKB-α、BAX蛋白的表达:（1）与敏感株K562相比,耐药细胞K562/ADR中p53、IKB-α、BAX蛋白表达较低（P＜0.05）;（2）不同浓度秦巴硒菇提取物FA-2-b-β干预后,耐药细胞K562/ADR中p53、IKB-α、BAX蛋白表达逐渐升高（P＜0.05）。7.秦巴硒菇提取物FA-2-b-β下调耐药细胞K562/ADR中ABCB1、NFKB1、mirRNA-125b基因的表达:（1）与敏感株 K562 相比,耐药细胞 K562/ADR 中 ABCB1、NFKB1、mirRNA-125b基因表达较高。（P＜0.05）;（2）不同浓度秦巴硒菇提取物FA-2-b-β干预后,耐药细胞K562/ADR中ABCB1、NFKB1、mirRNA-125b 基因表达逐渐降低（P＜0.05）。8.秦巴硒菇提取物FA-2-b-β上调耐药细胞K562/ADR中TP53、NFKBIA、BAX基因的表达:（1）与敏感株K562相比,耐药细胞K562/ADR中TP53、NFKBIA、BAX基因表达较低。（P＜0.05）;（2）不同浓度秦巴硒菇提取物FA-2-b-β干预后,耐药细胞K562/ADR中TP53、NFKBIA、BAX蛋白表达逐渐升高（P＜0.05）。结论1.秦巴硒菇提取物FA-2-b-β能抑制耐药株K562/ADR及其敏感株K562细胞增殖,并且促进了两种细胞的凋亡;2.秦巴硒菇提取物FA-2-b-β可以逆转K562/ADR细胞对ADR的耐药性,其机制可能与抑制细胞内NF-KB信号通路的表达有关。3.秦巴硒菇提取物FA-2-b-β抑制耐药细胞K562/ADR的增殖过程,其机制可能与抑制mirRNA-125b表达有关。