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目的:往小鼠气管内注射脂多糖创建急性肺损伤模型,观察外源性输入重组人髓源性生长因子(rhMYDGF)对急性肺损伤的保护作用。利用脂多糖LPS攻击小鼠肺泡上皮细胞(MLE-12),模仿内毒素对肺组织造成的损伤,观察重组人髓源生长因子对受损的肺泡细胞有无作用。利用鸡胚尿囊膜血管生成新生观察组人髓源性生长因子对新生血管的作用。研究方法:1、动物实验:选取30只雄性6-8周龄、体重为23±3g的BALB/c小鼠,利用随机法将30只小鼠分为3组:对照组、LPS损伤组(即模型组)、LPS+rhMYDGF组(即治疗组),每组10只小鼠。LPS损伤组及LPS+rhMYDGF组小鼠向其气管内注射LPS(5mg/ml,75μl),向对照组小鼠的气管内注射等量的无菌生理盐水。LPS+rhMYDGF组小鼠在气管内注射LPS前4h预先经尾静脉注射重组人髓源性生长因子(50ug/ml,100ul),LPS损伤组及对照组小鼠同时期经注射等量无菌PBS。12小时后开始处死小鼠并采集标本,通过肺部HE染色切面于显微镜下观察,对小鼠肺组织病理学改变进行评估。计算肺组织湿干比值(W/D),对小鼠肺组织行支气管肺泡灌。将灌洗液(BALF)内的细胞于显微下进行计数。从小鼠BALF中蛋白浓度水平评价小鼠肺水肿严重程度。利用ELISA试剂盒检测小鼠血清及肺组织匀浆内炎性细胞因子。2、细胞实验:分四组A:对照组;B:rhMYDGF组;C:LPS组;D:LPS+rhMYDGF组。C、D组用LPS(20μg/ml)刺激MEL-12细胞,A组为DMEM/F12培养基正常培养的MLE-12细胞,B、D组加入rhMYDGF(100ng/ml),使用CCK-8方法检测各组MLE-12的活性。3、鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管生成实验:新鲜种鸡蛋孵化7d选择其中发育正常鸡胚随机分为空白对照组、PBS组、低剂量rhMYDGF组、中剂量rhMYDGF组、高剂量rhMYDGF,每组各10枚。通过气室分别向各组加入30 u L样品(低、中和高剂量rhMYDGF组为溶于PBS中浓度分别为10、100和500ng/m L的MYDGF溶液)。2d后对CAM新生血管进行拍照,拍照记录CAM血管新生情况,计数1×1cm圆形边缘与CAM血管交叉的血管条数,计为VN,利用IPP6.0软件对CAM图像进行处理。剖析CAM血管面积及CAM面积比值的差异,将两者比值计为VA/CAM。结果:1.动物实验:HE染色的可见小鼠预先经rh MYDHF处理后的其肺组织发生的损伤程度减轻。与空白对照组相比,肺部损伤的模型组肺W/D比值、BALF中细胞细胞计数、BALF中蛋白浓度水平增高明显、血清中炎性细胞因子TNF-α水平增高明显,IL-1β及IL-6水平也增高明显(P<0.05),而治疗组小鼠上述指标较模型组减低较为明显(P<0.05)。2.细胞实验:CCK-8法检测细胞OD值,B组值高于A组,差异显著(P<0.05)。A组值高于C组,差异显明显(P<0.05),D组值高于C组,差异明显(P<0.05)。3.鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管生成实验:空白对照组与PBS组血管计数VN、VA/CAM比值差异不显著(P>0.05),rhMYDGF在剂量100ng/m L与500ng/m L浓度时,其血管计数VN、VA/CAM比值明显高于PBS组,差异显著(P<0.05)。而rhMYDGF在剂量10ng/m L时,其血管计数VN、VA/CAM比值,相比较于PBS组差异不明显(P>0.05)。结论:利用LPS气管内注射制作小鼠急性肺损伤模型稳定,其发病机制可能与血清中炎性因子TNF-α的水平、IL-1β的水平以及IL-6水平增高有关,预先用rhMYDGF处理小鼠后,小鼠肺组织遭受到的损伤程度减轻,并且血清中炎性因子TNF-α的水平、血清中IL-1β及血清中IL-6水平均有较为明显的降低。细胞实验说明rhMYDGF有促进MLE-12增殖、减轻LPS造成MLE-12损伤的作用。CAM新生血管实验中证实rhMYDGF可增加CAM血管的新生。对于急性肺损伤或者缺血相关性疾病,MYDGF或许会成为新的潜在治疗靶点。