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目的 DM已成为继癌症、心血管疾病后的第三大威胁人类健康的疾病。近年来，一系列动物实验及临床研究提示氧化损伤是DM及其并发症发生发展的共同机制之一，但目前对于DM氧化损伤机理的系统研究尚未给予足够重视，尚缺乏不同层次氧化损伤的系统资料。另外，动物模型是DM研究的重要前提之一，目前以STZ为基础建立的模型最为常用。近年来部分实验对STZ特异性胰岛B细胞损伤提出挑战。因此，本课题拟通过部分实验深入探讨不同层次的ROS诱发因素、发生部位、反应特点、作用阶段、损伤类型、致病过程；进一步认识DM氧化损伤机理；探讨STZ是否存在胰岛外损伤作用。 方法 本课题通过体外水介质体系实验，建立蛋白糖基化反应体系，研究不同干预因素对体外蛋白糖基化的影响；通过建立微粒体LPO模型系统，研究不同干预因素在亚细胞水平上对LPO的影响；通过分离、培养原代大鼠肝细胞，研究不同干预因素对肝细胞氧化／抗氧化系统及受体的影响：通过复制STZ动物DM模型，研究、验证STZ在动物整体水平胰岛外损伤作用及其机理。 结果 体外水介质体系实验表明：H2O2与ROS激发剂(CHP和VitC／Fe2+)对蛋白糖基化均有显著影响，呈现一定的时间-效应关系及剂量-效应关系；体外制备的AGEs在EM 440～450nm范围内具有特征性荧光光谱；GSH、LA与蛋白糖基化反应体系共育后AGEs含量均显著下降，GSH强于LA的作用，但对体系内羰基含量无明显影响；Ins糖基化反应体系中AGEs含量显著升高。肝微粒体模型系统实验结果表明：随着STZ浓度的增高，三类微粒体模型MDA含量亦相应增加；随着微粒体中D-Glu血清溶液终浓度的升高，MDA含量亦相应增加，而未观察到其水溶液有此作用：AGEs原液组MDA含量明显高于对照组和其它浓度组。细胞实验表 第四军医大学硕十学位论文明:原代分离后的肝细胞呈单个分散状态，呈透亮，具有立体感的圆形细胞，台盼蓝排斥实验显示约80%细胞的胞浆及核均排斥染色:HZO:在较高浓度（80、160林mol.L一‘）下大鼠肝细胞高亲和力受体Bmaxl和Kdl明显升高，在4。林mol·L一，浓度下低亲和力受体KdZ降低;D一Glu在6.25和12.smmol.L一，终浓度下对大鼠肝细胞T-sOD活性和MDA含量影响不显著，但在25和50 ol.L一’终浓度下T-soD活性明显降低，MDA含量显著升高;不同浓度AGES与肝细胞共育12h后，T-SOD与Mn一SOD活性均显著降低，MDA含量均显著升高;不同剂量STZ与大鼠肝细胞共育4h后，T-SOD与Mn一SOD活性无显著变化，但在较高剂量（l .5与1.smg.mL一’）下MDA含量显著升高。动物实验结果表明:注射sTz后高剂量组动物出现多饮、多尿、多食、脱毛、体重下降，血糖呈三时相变化，而低剂量组这些变化不明显;在动物整体水平未发现Ins降糖后的模型动物MDA含量、SOD、GSH、GSSH与正常对照组具有明显差别。结论基于以上结果，初步得出以下结论:①ROS以及ROS激发体系能够促进体外蛋白质糖基化作用，具有显著的时间一效应关系和剂量一效应关系;②建立了蛋白糖基化研究的相关方法;体外制备AGEs是成功的;原位二步灌注法原代分离后的大鼠肝细胞符合本实验要求;STZ诱导的高血糖动物模型是成功的;③AGEs能促进微粒体系统及肝细胞氧化损伤，具有剂量依赖性;④GSH与LA等抗氧化剂对体外蛋白质糖基化均有显著的抑制作用，GSH强于LA的作用;⑤发现了Ins蛋白出现糖基化的体外证据:⑥初步证明了STz能引起微粒体和肝细胞广泛性氧化损伤。⑦体外实验初步提示血清可能存在D一Glu引发氧化损伤的重要机制;⑧初步证实ROS（HZOZ）对IR最大结合容量及解离常数均有显著影响，具有剂量一效应关系‘