【摘 要】
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本文利用葡萄球菌特异性基因16S rRNA、金黄色葡萄球菌属特异性coa基因、甲氧西林耐药性mecA基因以及肠毒素sea、seb、sec基因为检测靶点,开发了一种能同时检测金黄色葡萄球
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本文利用葡萄球菌特异性基因16S rRNA、金黄色葡萄球菌属特异性coa基因、甲氧西林耐药性mecA基因以及肠毒素sea、seb、sec基因为检测靶点,开发了一种能同时检测金黄色葡萄球菌甲氧西林抗性和肠毒素A、B、C的多重PCR方法。并通过对71株金黄色葡萄球菌和51株非金黄色葡萄球菌菌株进行检测,来评价该方法的性能。16S rRNA和coa基因在金黄色葡萄球菌中出现率100%(71/71),肠毒素sea基因出现率47.9% (34/71),seb基因的出现率5.6% (4/71),sec基因的出现率8.5% (6/71),甲氧西林抗性基因mecA的出现率为39.4% (28/71)。本方法检测金黄色葡萄球菌DNA的灵敏度为104.5 pg/PCR,菌落灵敏度为2.4×103 CFU /ml。检测准确率为98.6%。可在3-4小时之内完成包括鉴定金黄色葡萄球菌、鉴定金黄色葡萄球菌甲氧西林抗性和鉴定金黄色葡萄球菌A、B、C三种肠毒素等5项指标。本研究还采用基因芯片技术,在多重PCR技术的基础上,在基因芯片中又集成了金黄色葡萄球菌肠毒素sed,seg和sei基因以及金黄色葡萄球菌阳性控制基因femB。采用单碱基延伸技术制作了金黄色葡萄球菌鉴定芯片,并对关键性温度参数如多重PCR退火温度与芯片杂交温度进行了组合优化,芯片的检测灵敏度为每个样品可检测0.3ng DNA,灵敏度相当于108个金黄色葡萄球菌基因组拷贝。
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