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基孔肯雅病毒(Chikungunya virus)属于披膜病毒科(Togaviridae)甲病毒属(alphavirus)病毒，寨卡病毒(Zika virus)属于黄病毒科(Flaviviridae)黄病毒属(Flavivirus genus)病毒，这两种病毒基因组均为单股正链RNA，病毒粒子均包被囊膜，这两种病毒均为经由蚊虫传播的致病性病毒，两种病毒的感染都会引起发热等症状，严重威胁着人类的生命健康。目前对这两种病毒的研究并不透彻，且没有有效的预防和治疗手段。基孔肯雅病毒非结构蛋白nsP2和寨卡病毒非结构蛋白NS3具有相似的功能，均负责病毒多聚蛋白的切割以及新生基因组RNA的解螺旋。非结构蛋白在RNA病毒复制过程中发挥重要的功能，本文制备针对这两种病毒具有相似功能非结构蛋白的抗体，为研究病毒复制机制以及抗病毒研究提供了材料支持。本文主要包括两部分工作:(1)基孔肯雅病毒非结构蛋白nsP2单克隆抗体的制备;(2)寨卡病毒非结构蛋白NS3单克隆抗体的制备。 (1)基孔肯雅病毒非结构蛋白nsP2单克隆抗体的制备 基孔肯雅病毒非结构蛋白nsP2在病毒复制过程中发挥重要功能，通过原核表达nsP2N端467个氨基酸作为免疫原免疫小鼠获得多抗。初步对多抗进行验证，IFA和western blot结果表明原核表达的基孔肯雅病毒nsP2N467作为免疫原，产生的多克隆抗体能够检测到病毒感染真核细胞中nsP2的表达，ELISA检测表明四次免疫后小鼠血清抗体滴度达到100万倍稀释，达到单克隆抗体制备的要求。后续免疫的小鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合后，使用原核表达的nsP2作为筛选抗原进行筛选，获得21株ELISA阳性克隆，进一步对获得的单克隆细胞株进行免疫荧光验证，结果表明仅两株单克隆能应用于免疫荧光检测。通过亚克隆，获得这两株细胞的单克隆细胞系，并成功制备高滴度、高特异性的腹水抗体。此部分，获得了两株针对基孔肯雅病毒非结构蛋白nsP2的单克隆抗体，为研究非结构蛋白nsP2在病毒复制过程中的功能提供了良好的实验材料。 (2)寨卡病毒非结构蛋白NS3单克隆抗体的制备 首先使用原核表达、Ni柱亲和层析纯化的寨卡病毒非结构蛋白NS3作为免疫抗原免疫小鼠获得多抗。初步对多抗进行验证，IFA结果表明原核表达的寨卡病毒NS3蛋白作为免疫原，产生的抗体能够检测到病毒感染真核细胞中NS3的表达，ELISA检测表明四次免疫后小鼠血清抗体滴度达到100万倍稀释。通过细胞融合获得杂交瘤细胞，使用原核表达的NS3蛋白筛选获得62株ELISA阳性克隆，通过免疫荧光验证获得39株能够与病毒感染细胞起反应的克隆，对这些IFA阳性克隆进行亚克隆，获得28株单克隆细胞系。寨卡病毒NS3蛋白的单克隆抗体可以应用于寨卡病毒非结构蛋白NS3与其他非结构蛋白之间相互作用研究，另外，NS3蛋白的单克隆抗体可能成为潜在的抗病毒感染治疗试剂。