研究目的:建立一种敏感及特异的针对EGFR基因突变比例检测的PASS技术平台,了解该检测方法的可靠性及临床指导意义,从而为临床上晚期NSCLC患者筛选出合适的治疗方案提供理论基础。研究方法:1.采用分子克隆技术,以pQE30为框架质粒分别构建出野生型含人EGFR基因19号外显子和21号外显子的重组质粒,以及携带E746-A750缺失突变的19号外显子和携带L858R突变的21号外显子序列的重组质粒,构建完成后分别经限制性内切酶酶切鉴定和测序鉴定。2.根据参考文献及课题组前期建立的方法设计EGFR相应外显子的特异性PASS扩增引物和测序引物,然后用上述构建成功的含野生型及突变型EGFR基因片段的质粒为检测模板,按照PASS检测程序进行检测,摸索并建立PASS检测技术平台并摸索出该方法检测EGFR基因突变比例的最佳条件,并验证其检测灵敏度、正确度及最低检测限。研究结果:1.本研究分别成功构建出了含野生型和突变型人EGFR基因19号及21号外显子的重组质控质粒,其序列与NCBI数据库序列完全相同。2.本研究成功建立起可靠的EGFR基因突变比例检测的PASS技术平台,且该检测方法的灵敏度、正确度及检测限均达到检测要求。研究结论:本研究成功建立了的一种高度灵敏及特异的人EGFR基因突变比例检测的PASS技术,为后期临床标本的相关检测及其在临床上精准选择适宜EGFR-TKI靶向治疗的晚期NSCLC患者中的应用奠定了良好的技术基础。