本研究以东北高寒地区的红花鹿蹄草为研究对象,建立了高效、快速、准确测定红花鹿蹄草中活性成分的分析方法,通过对东北高寒地区不同地域、不同生长季节红花鹿蹄草活性成分含量及抗氧化活性变化的研究,确定了红花鹿蹄草的最佳采收地域和时间;优化了新型绿色溶剂—低共熔溶剂结合微波辅助提取的工艺条件,并制备了一种价格低廉、吸附性强、绿色环保吸附材料—磁性纤维素小球,用于红花鹿蹄草中主要活性成分的富集分离。具体研究结果如下:1.建立了高效液相色谱同时分析检测红花鹿蹄草中八种活性成分的方法,色谱条件如下:色谱柱:KYA HIQ Sil C18W reversed-phase column(250 mm × 4.6 mm i.d.,5 μm),流速:1.0 mL/min,柱温:30℃,进样量:10 μL,检测波长:254 nm、265 nm 和 280 nm。流动相组成为0.1%的甲酸水溶液(A)-甲醇(B),梯度洗脱条件为:0-5 min 12-18%(B),5-15 min 18-27%(B),15-20 min 27%(B),20-32 min 27-38%(B),32-40 min 38-41%(B),40-55 min 41%(B),55-60 min 41-45%(B),60-65 min 45-55%(B),65-70 min 55%(B),70-75 min 55-65%(B),75-80 min 65-75%(B),80-85 min 75%(B)。利用高效液相色谱首次实现了红花鹿蹄草中8种活性成分的分离、定性及定量。本方法精密度高、重复性好、准确度高,适用于红花鹿蹄草活性成分的分析检测。2.研究了东北高寒地区不同地域红花鹿蹄草活性成分含量及抗氧化活性的变化(1)考察了东北高寒地区的8个红花鹿蹄草主要产区(塔河、新林、图里河、加格达奇、胜山、大杨树、五大连池、五营)红花鹿蹄草的品质。其中,塔河和图里河的样品具有较高的总酚和总黄酮含量,同时这两个地区具有较好的DPPH和ABTS自由基清除活性,塔河样品的DPPH自由基清除活性的IC50值与阳性对照Vc相当。此外,塔河、图里河、大杨树、新林的样品都具有很好的还原能力,活性明显高于阳性对照BHT。(2)高效液相色谱分析发现金丝桃苷和2’-O-没食子酰基金丝桃苷是红花鹿蹄草中的主要活性成分,其含量明显高于其它活性成分。采用主成分分析的方法研究了抗氧化活性与活性成分之间的相互关系。结果表明,塔河的红花鹿蹄草具有较高的品质,适合作为红花鹿蹄草的资源产地进行开发。3.研究了不同生长季节的红花鹿蹄草活性成分含量及抗氧化活性的变化(1)以品质最好的塔河地区作为采样地,测定该地区5-10月份红花鹿蹄草活性成分含量及抗氧化活性变化,8、9月份的红花鹿蹄草样品总酚含量较高,同时具有较好的DPPH和ABTS自由基清除活性、还原力及FRAP活性,并且在ABTS和FRAP实验中,8、9月份样品的活性明显高于阳性对照Vc。(2)高效液相色谱法分析红花鹿蹄草中主要的活性成分金丝桃苷、2’-O-没食子酰基金丝桃苷,这两种活性成分在8、9月份的样品中含量较高。主成分分析法对5-10月份的样品的品质进行了评价,发现8、9月份样品具有较好的品质,适于作为红花鹿蹄草的最佳采收时间。4.优化了微波辅助低共熔溶剂提取红花鹿蹄草中的活性成分的提取工艺考察了多元醇-低共熔溶剂的组成和配比,多元醇-低共熔溶剂中加入水的百分比、提取温度、提取时间、液固比对提取率的影响,确定了最佳提取工艺参数:多元醇-低共熔溶剂:氯化胆碱:1,4-丁二醇=1:4(摩尔比)溶剂中加入水的百分比:加入体积分数30%的水提取温度:70℃提取时间:20 min液固比:10:1在上述最佳提取工艺条件下,对红花鹿蹄草中金丝桃苷、2’-O-没食子酰基金丝桃苷、槲皮素、槲皮苷和梅笠草素提取率的平均值分别为1.617 mg/g、4.908 mg/g、0.090 mg/g、0.041 mg/g 和 0.347 mg/g。5.首次制备了绿色环保的新型高效吸附材料—磁性纤维素小球以脱脂棉作为制备纤维素小球的基质,经过将其溶解、制成粘胶液、反向悬浮聚合等过程,最终形成纤维素小球。再用稀盐酸制孔,环氧氯丙烷改性和一系列基团的接枝改性,形成了具有不同胺基、酰胺基和酯基基团的接枝改性的纤维素小球,最后通过化学共沉淀的方法将Fe3O4固载在接枝改性的纤维素小球上。先后通过红外光谱法、X光衍射法和扫描电镜法对其进行分析。红外光谱法的结果显示接枝了胺基、酰胺基和酯基的纤维素小球上出现了相应的特征峰,同时红外光谱和X光衍射都出现了 Fe304的特征峰。而通过扫面电镜也观察到纤维素小球表面出现许多颗粒状的结构,能谱分析发现固载Fe3O4的纤维素小球出现Fe元素。最后,通过振动样品磁强计的测定,结果表明制备的固载Fe3O4的纤维素小球,具有超顺磁磁性,磁性的大小分别为:CB+Fe3O4 7.1197 emu/g、CB-amine group+Fe3O4 5.2476 emu/g、CB-amide group+Fe3O4 1.5765 emu/g 和CB-estergroup+Fe3O4 1.5097 emu/g。6.应用磁性纤维素小球研究了对红花鹿蹄草中主要活性成分的富集分离比较了 1 0种常用大孔吸附树脂和7种磁性纤维素小球对金丝桃苷和2’-O-没食子酰基金丝桃苷的吸附和解吸能力。结果表明,制备的磁性纤维素小球对两种目标成分的吸附量远高于大孔吸附树脂的吸附量,且磁性纤维素小球CB-TETA+Fe3O4对两种目标成分的吸附量最大。进而对CB-TETA+Fe3O4进行了吸附动力学和吸附等温曲线的研究,结果表明,吸附过程符合二级动力学模型,且容易发生吸附行为,适于用作红花鹿蹄草中金丝桃苷和2’-O-没食子酰基金丝桃苷的富集分离。本论文完成了东北高寒地区红花鹿蹄草品质的系统评估和活性成分提取工艺的优化,为红花鹿蹄草资源的合理开发利用提供了必要的科学依据,也为规模化提取、富集分离红花鹿蹄草中的活性成分提供了技术支持。同时,本论文首次制备了一种新型磁性纤维素小球吸附材料,为天然产物的富集分离提供了一种新型环保吸附材料,其产业化前景极其广阔。