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[目的]本实验以人乳腺癌临床样本及人乳腺癌细胞系为研究对象,检测趋化因子配体 16(CXC Motif Chemokine Ligand 16,CXCL16)mRNA 在癌组织和癌旁组织中的表达水平,并分析CXCL16与浸润性乳腺癌患者临床特征之间的相关性。检测CXCL16 mRNA和蛋白在三阴型乳腺癌细胞(MDA-MB-231)和雌激素受体阳性乳腺癌细胞(MCF-7)中表达水平,CXCL16对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响,以及通过检测CXCL16激活NF-κB信号通路调控下游基因尿激酶型纤溶酶原激活剂(Uridylyl Phosphate Adenosine,u-Pa)、基质金属蛋白酶 9(Matrix Metallo-Proteinase-9,MMP9)及血管内皮因子(Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF)和该通路相关分子非磷酸化 p65(t-p65)、磷酸化 p65(p-p65)、非磷酸化IκBα(t-IκBα)、磷酸化 IκBα(p-IκBα)mRNA和蛋白的表达水平。进而探讨CXCL16调控乳腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的相关机制,对发现新的乳腺癌诊断标记物及治疗靶点具有重要意义。[方法]1.于2019年3月至8月昆明医科大学第一附属医院及昆明医科大学第一附属医院呈贡医院乳腺外科收集病理确诊为浸润性乳腺癌样本43例。用实时荧光定量反转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)实验方法检测CXCL16 mRNA在乳腺癌组织和癌旁组织中的表达水平,分析乳腺癌组织中CXCL16 mRNA的表达水平与腋窝淋巴结是否转移、TNM分期、病理分子分型及术后复发风险等临床特征之间的相关性。2.培养MDA-MB-231和MCF-7细胞,用qRT-PCR和Western Blot实验方法检测CXCL16mRNA和蛋白在不同侵袭能力乳腺癌细胞株中的表达水平,分析比较CXCL16与不同侵袭能力乳腺癌细胞株的相关性。3.用CXCL16质粒通过瞬时转染实验方法在MDA-MB-231和MCF-7细胞中构建过表系,用qRT-PCR和Western Blot实验方法检测过表达CXCL16的MDA-MB-231和MCF-7细胞转染情况。4.采用CCK8细胞增殖实验方法检测过表达CXCL16的MDA-MB-231和MCF-7细胞增殖能力。5.通过细胞划痕实验和Transwell小室实验方法检测过表达CXCL16的MAD-MB-231和MCF-7细胞迁移和侵袭能力。6.用qRT-PCR实验方法检测NF-κB信号通路下游基因u-PA、MMP9和VEGF mRNA在过表达CXCL16的MDA-MB-231和MCF-7细胞中的表达水平;用Western Blot实验方法检测NF-κB信号通路相关分子t-p65、p-p65、t-IκBα、p-IκBα在过表达CXCL16的MDA-MB-231和MCF-7细胞中的活化水平。使用NF-κB通路抑制剂后,用qRT-PCR和Western Blot实验方法再次检测下游基因mRNA和相关分子蛋白的表达水平。[结果]1.CXCL16 mRNA在乳腺癌组织和癌旁组织中均有表达,且在癌组织中表达显著高于癌旁组织。(P<0.001,差异有显著统计学意义)2.癌组织中CXCL16 mRNA表达水平与患者腋窝淋巴结转移情况、TNM分期、病理分子分型及术后复发风险之间均有相关性。且在有腋窝淋巴结转移、TNM分期越高、术后复发风险越高的浸润性乳腺癌中表达越高。(P<0.05,差异有统计学意义)3.CXCL16 mRNA和蛋白在MDA-MB-231和MCF-7细胞中均表达,且在MDA-MB-231细胞中表达高于MCF-7细胞。(P<0.05,差异有统计学意义)4.过表达CXCL16的MDA-MB-231和MCF-7细胞增殖、迁移及侵袭能力均增强。(P<0.05,差异有统计学意义)5.NF-κB信号通路下游基因u-PA、MMP9、VEGF mRNA和该通路相关分子t-p65、p-p65、t-IκBα、p-IκBα 蛋白在过表达 CXCL16 的 MDA-MB-231和MCF-7细胞中表达均上调。在NF-κB通路抑制剂的作用下,以上相关基因mRNA和分子蛋白表达均下调。(P<0.05,差异有统计学意义)[结论]1.CXCL16 mRNA在乳腺癌组织中的表达水平高于癌旁组织,提示CXCL16在乳腺癌发生发展中具有促癌作用。2.癌组织中CXCL16 mRNA表达水平与腋窝淋巴结转移情况、TNM分期及术后复发风险之间有相关性。在有腋窝淋巴结转移、TNM分期越高及术后复发风险越高的浸润性乳腺癌中其表达越高,提示CXCL16 mRNA的表达水平与浸润性乳腺癌的恶性行为呈正相关。3.CXCL16 mRNA和蛋白在高侵袭性乳腺癌细胞(MDA-MB-231)中的表达水平高于低侵袭性乳腺癌细胞(MCF-7),提示CXCL16 mRNA的表达水平可能与乳腺癌侵袭性有关。4.过表达CXCL16的乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力均增高,提示CXCL16具有促进乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用。5.在过表达CXCL16乳腺癌细胞中,NF-κB通路下游基因u-PA、MMP9及VEGF mRNA和该通路相关分子t-p65、p-p65、t-IκBα及p-IκBα蛋白表达均上调。当使用NF-κB通路抑制剂(BAY 11-7082)时,其下游基因及相关分子表达均下调。提示CXCL16可能通过激活NF-κB信号通路调控下游基因和相关分子,进而促进乳腺癌发生发展。